ICS11.220 CCS B 41 DB65 新疆维吾尔自治区地方标准 DB 65/T 4539—2022 陆生野生动物疫病检测样本采集、保存及运 输技术规范 Technical specification for collection,storage and transportation of samples for terrestrial wildlife infectious disease detection 地方标准信息服务平台 2022-10-10发布 2022－12－09实施 新疆维吾尔自治区市场监督管理局 发布 地方标准信息服务平台 DB 65/T4539—2022 前言 本文件按照GB/T1.1一2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）提出。 本文件由新疆维吾尔自治区畜牧兽医局归口并组织实施。 本文件起草单位：新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）、新疆维 吾尔自治区蝗虫鼠害预测预报防治中心站（野生动物疫源疫病监测站）、新疆农业职业技术学院、阿勒 泰地区野生动植物保护监测站、塔城地区野生动植物保护监测站、伊犁州野生动植物保护监测站、乌鲁 木齐市动物疾病控制与诊断中心、阿勒泰地区畜牧工作站、乌苏市畜牧兽医站、塔城地区疾病预防控制 中心。 本文件主要起草人：杨学云、黄炯、吴建勇、玛莎·穆汉、孟肖潇、李建军、柳旭伟、兰文旭、葛 文霞、陈强、努尔马提·加伊尔巴依、库尔班江·哈那哈提、古努尔·吐尔逊、蔡扩军、阿依乔丽凡·沙 汉、洪都孜·波拉提、努尔拜和提·努尔旦、邓强、陆桂丽、汪萍、金映红、薛晶、陈翔宇、王跃、塔 拉普别克·哈依尔别克、孙鹏、刘虹、张玉华、陈莉。 本文就实施应用中的疑问，请咨询新疆维吾尔自治区畜牧兽医局、新疆畜牧科学院兽医研究所（新 疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）。 对本文件的修改意见建议，请反馈至新疆维吾尔自治区畜牧兽医局（新疆乌鲁木齐市天山区新华南 路408号）、新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）（新疆乌鲁木齐市 新市区冬融街726号）、新疆维吾尔自治区市场监督管理局（新疆乌鲁木齐市天山区新华南路167号）。 新疆维吾尔自治区畜牧兽医局联系电话：0991-8568089：传真：0991-8527722；邮编：830004 新疆畜牧科学院兽医研究所（新疆畜牧科学院动物临床医学研究中心）联系电话：0991-3098109； 传真：0991-3098109；邮编：830013 新疆维吾尔自治区市场监督管理局联系电话：0991-2818750；传真：0991-2377250；邮编：830004 地方标准信息服务平台 地方标准信息服务平台 DB65/T4539—2022 陆生野生动物疫病检测样本采集、保存及运输技术规范 1范围 本文件规定了陆生野生动物疫病检测样本采集的术语和定义、样本采集要求、采样前准备、样本采 集与处理、样本的保存、包装和运输等技术要求。 本文件适用于新疆维吾尔自治区境内陆生野生动物疫病监测采样工作。 2规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 NY/T561-2015动物炭疽诊断技术 DB65/T4124病死动物无害化处理技术规程 高致病性动物病原微生物菌（毒）种或者样本运输包装规范中华人民共和国农业部公告第503号 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3. 1 陆生野生动物terrestrialwildlife 生存在自然自由状态下的陆生脊椎动物，主要包括哺乳类和鸟类。 3. 2 灭菌 sterilization 采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施。 标准信息服务平台 3.3 冷藏chilled 8℃以下、冷冻点以上的保存条件。 3. 4 冷冻frozen 小于或等于-18℃的保存条件。 4样本采集要求 4.1解剖时间要求 凡发现死亡的陆生野生动物，应按NY/T5612015中2.1.2条的规定排除炭疽的可能后，夏天在动 物死亡6h内采集完成，冬天在动物死亡24h内完成采集。 4.2采样安全要求 DB 65/T 4539—2022 4.2.1人员安全要求 采样人员应加强个人安全防护，穿戴防护服、口罩、手套、鞋套及护目镜等。 4.2.2动物安全要求 活体采样保定动物时，应避免过度刺激和损害陆生野生动物，同时对动物进行可靠保定，防止对人 员造成伤害，必要时进行化学保定 4.2.3生物安全要求 采样完成后，采样过程中产生的废弃物和残留的陆生野生动物尸体，应按照DB65/T4124的规定进 行无害化处理。 5采样前准备 5.1人员防护用品及记录材料 主要包括但不限于防护服、鞋套、手套、口罩、护目镜、消毒药品、记号笔。采样信息记录表参见 附录A。 5.2样本采集、处理用品 主要包括但不限于5mL全血样本保存管（含EDTA抗凝剂）、2mL血清样本保存管、50mL组织样本 保存管、10mL棉拭子样本保存管、兽用采血器（5mL）、棉签、酒精棉球、碘酊棉球、解剖刀、斧头、 骨锯、剪刀、镊子、自封袋和封口膜等。 5.3样本保存及运输装备 主要包括但不限于车载冰箱、液氮容器、保温箱、冰盒、吸水填充材料、包装胶带、警示标识等。 5.4试剂 5.4.10.1mo1/L磷酸盐缓冲液（PBS，pH7.4），配置方法见附录B的B.1。 标准信息服务平台 5.4.20.04mo1/LPBS（pH7.4），配置方法见附录B的B.2。 5.4.30.01mo1/LPBS（pH7.4），配置方法见附录B的B.3。 5.4.450%甘油-PBS保存液，配置方法见附录B的B.4。 6样本采集与处理 6.1样本采集种类 活体采样一般采集血液、粪便、鼻咽拭子、泄殖腔子等样本。死亡的陆生野生动物一般采集血深 粪便、鼻咽拭子、泄殖腔拭子和内脏组织等；死亡的小型陆生野生动物可直接采集整尸。 6.2血液样本采集及处理 6.2.1采血部位及采血量 2 DB 65/T 4539—2022 应根据陆生野生动物种类选择不同的采血部位和采血量，常见陆生野生动物活体采血部位及采血量 见表1。 表1常见陆生野生动物活体采血部位及采血量 反台动物、 野生动物种类 野猪 犬科动物 小型兽类 鸟类 马属动物 首选部位 颈静脉 前腔静脉 前肢头静脉 心脏或尾尖 翅下静脉 采血部位 次选部位 尾静脉 尾静脉、剪耳 耳缘静脉 耳缘静脉 腿部内侧静脉 采血量 6. 0 mL~10.0 mL 0.5mL~2.0mL 6.2.2采血方法 除去采血部位的被毛，用3%～5%碘酐消毒后，再用75%的酒精棉球由内向外螺旋式脱碘消毒，干燥 后采用兽用采血器或真空采血器穿刺采血。对于死亡的陆生野生动物，剖开胸腔采集心脏或胸腔残留的 血液或血块。 6.2.3血液样本的处理 6.2.3.1全血样本处理 将采集的血液注入含EDTA抗凝剂的保存管中，冷藏或冷冻保存。 6.2.3.2血清样本处理 将用于分离血清的血液样本22℃～37℃静置6h～8h或过夜，待血清析出后无菌剥离血凝块，1000 g离心3min～5min，吸取上清装入血清保存管，冷藏或冷冻保存。 6.3拭子样本采集 6.3.1鼻咽拭子样本 用无菌棉签，在鼻腔或咽喉部转动至少3圈，采集鼻腔或咽部分泌物；蘸取分泌物后，立即将拭子 浸入装有1mL50%甘油-PBS保存液的保存管（10mL），剪去露出部分，盖紧保存管盖，密封后冷藏或 冷冻保存。 你准 6.3.2眼结膜拭子样本 用无菌棉签轻轻擦拭眼结膜表面，蘸取分泌物；蘸取分泌物后，立即将拭子浸入装有1mL0.01mo1/L PBS（pH7.4）保存液的10mL保存管中，剪去露出部分，盖紧保存管盖，密封后冷藏或冷冻保存。 6.3.3泄殖腔拭子样本 PBS（pH7.4）保存液的10mL保存管中，剪去露出部分，盖紧保存管盖，密封后冷藏或冷冻保存。 6.4 组织样本采集 6.4.1组织样本种类 主要采集心脏、肝脏、肺脏、脾脏、肾脏、脑组织、淋巴结、喉头、支气管、食管和肠管等样本。 3