(19)国家知识产权局 (12)发明 专利申请 (10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请 号 202210678031.7 (22)申请日 2022.06.16 (71)申请人 江苏康尚生物医疗科技有限公司 地址 212300 江苏省镇江市丹阳市开发区 圣昌西路8号 (72)发明人 黄利寒　钱海波　张雪　李迎春　 (74)专利代理 机构 镇江至睿专利代理事务所 (普通合伙) 3252 9 专利代理师 刘静 (51)Int.Cl. G01N 21/78(2006.01) G01N 21/01(2006.01) (54)发明名称 一种肝功三联检测试卡及其制备方法 (57)摘要 本发明公开了一种肝功三联检测试卡及其 制备方法， 包括压板、 底座、 检测单元， 检测单元 的四组反应层包括谷丙转氨酶检测单元、 谷草转 氨酶检测单元、 白蛋白检测单元、 空白检测单元， 肝功三联检测试卡用于定量测定人体全血、 血 清、 血浆中谷丙转氨酶、 谷草转氨酶活性及白蛋 白含量， 项目之间互相独立， 不互相干扰， 保证检 测结果的准确度； 肝功三联检测试卡样本量为 45ul， 检测时间为3min， 一次加样可同时检测谷 丙转氨酶、 谷草转氨酶、 白蛋白三个项目； 在检测 过程中无需专业人员操作、 无废液处理要求、 快 速诊断等优势， 配套仪器小型， 可随时移动， 不受 时间、 地点的限制， 适用于急救、 急诊、 家庭、 药 店、 社区医院、 门诊、 体 检中心等场所。 权利要求书2页 说明书7页 附图3页 CN 115219485 A 2022.10.21 CN 115219485 A 1.一种肝功三联检测试卡， 其特征在于： 包括压板(1)、 底座(2)、 检测单元(3)， 所述压 板(1)上设有加样孔(11)， 所述底座(2)上设有四个底座检测孔(21)、 底座(2)卡槽， 所述检 测单元(3)固定在底 座(2)卡槽中， 且压板(1)卡设在检测单元(3)上方， 所述检测单元(3)包 括扩散层(31)、 滤血层(32)、 辅助层(33)、 反应层(34)， 且四者依次叠放， 所述辅助层(33)与 反应层(34)整体 分为四组， 且相互间隔， 所述四组反应层(34)包括谷丙转氨酶检测单元、 谷 草转氨酶检测单 元、 白蛋白检测单 元、 空白检测单 元。 2.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡， 其特征在于： 所述压板(1)选用高分子聚 合材料， 所述底 座(2)为透明塑料材质， 其中一面具有粘性， 可粘贴反应层(34)， 所述加样孔 (11)为椭圆形， 所述底座检测孔(21)为四个独立圆形， 所述扩散层(31)为一层均匀的各向 均性的亲水性纱网， 所述滤血层(32)选用玻璃纤维、 无纺布、 滤纸、 聚醚砜或聚醚砜材料任 意一种材料制成， 所述辅助层(33)为玻璃纤维膜， 所述反应层(34)选用不同孔径的聚砜系 列膜、 GR/GF/GX系列膜、 尼龙膜、 聚醚砜或聚砜膜类材质中的任意一种， 且反应层(34)上附 有相应的谷丙转氨酶检测单 元、 谷草转氨酶检测单 元、 白蛋白检测单 元、 空白检测单 元。 3.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡， 其特征在于： 所述谷丙转氨酶检测单元包 括谷丙转氨酶反应试剂， 所述谷丙转氨酶反应试剂包括缓冲体系、 丙酮酸氧化酶、 过氧化物 酶、 辅酶、 色原、 激活剂、 稳定剂， 所述缓冲体系为磷酸盐缓冲液、 Tris缓冲液或者Good`S缓 冲液中的任意一种， 浓度为0.05M ‑1.0M， 反应PH在6.5 ‑8.0； 丙酮酸氧化酶的浓度为50 ‑ 150U/ml， 过氧化物酶溶度为200 ‑1000U/ml； 辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷 酸， 黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为0.1mg/ml ‑0.2mg/ml， 硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml ‑1mg/ ml； 色原是单一组分或者两种组分的色原物质， 浓度为0.02％ ‑0.5％； 丙酮酸氧化 酶激活剂 采用Mg2+， 浓度为0.5g/L ‑1g/L； 酶的稳定剂为糖类糖类或蛋白类稳定剂， 在体系中的浓度 为0.5％‑2％。 4.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡， 其特征在于： 所述谷草转氨酶检测单元包 括谷草转氨酶反应试剂， 所述谷草转氨酶反应试剂包括缓冲体系、 丙酮酸氧化酶、 草酰乙酸 脱羧酶、 过氧化物酶、 辅酶、 色原、 激活剂和稳定剂， 其中， 缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、 Tr is 缓冲液或者Good`S缓冲 液中任意一种， 浓度为0.05M ‑1.0M， 反应PH在6.5 ‑8.0； 丙酮酸氧化 酶的浓度为50 ‑150U/ml， 草酰乙酸脱羧酶浓度为50 ‑150U/ml， 过氧化物酶溶度为200 ‑ 1000U/ml； 辅酶采用黄素腺嘌呤二核苷酸和硫胺素焦磷酸， 黄素腺嘌呤二核苷酸浓度为 0.1mg/ml ‑0.2mg/ml， 硫胺素焦磷酸浓度为0.5mg/ml ‑1mg/ml； 色原是单一组分或者两种组 分的色原物质， 浓度为0.02％ ‑0.5％； 丙酮酸氧化酶激活剂 采用Mg2+， 浓度为0.5g/L ‑1g/L； 酶的稳定剂为糖 类糖类或蛋白类稳定剂， 在体系中的浓度为0.5％ ‑2％。 5.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡， 其特征在于： 所述白蛋白检测单元包括白 蛋白反应试剂， 所述白蛋白反应试剂包括缓冲体系、 染料、 表面活性剂， 所示缓冲体系为柠 檬酸缓冲液、 丁二酸缓冲液或者苹果酸缓冲液中的任意一种， 浓度为0.5M ‑1.0M， 反应PH为 4.2； 染料为溴甲酚绿或者溴甲酚紫， 浓度为0.1％ ‑0.5％； 表 面活性剂为聚氧乙烯月桂醚 或 者曲拉通， 浓度为0.1％ ‑0.5％。 6.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡， 其特征在于： 所述对应谷丙转氨酶检测单 元的辅助层(33)包括谷丙转氨酶底物试剂， 所述谷丙转氨酶底物试剂包括缓冲体系、 L ‑丙 氨酸和α‑酮戊二酸， 所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、 Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中任权　利　要　求　书 1/2 页 2 CN 115219485 A 2意一种， 浓度为0.05M ‑1.0M， 反应PH在6.5 ‑8.0； L‑丙氨酸浓度为0.5M ‑1.0M， α‑酮戊二酸浓 度为5mM‑50mM。 7.根据权利要求1所述的肝功三联检测试卡， 其特征在于： 所述对应谷草转氨酶检测单 元的辅助层(33)包括谷草转氨酶底物试剂， 所述谷草转氨酶底物试剂包括缓冲体系、 L ‑天 冬氨酸和α ‑酮戊二酸， 所述缓冲体系选用磷酸盐缓冲液、 Tris缓冲液或者Good`S缓冲液中 任意一种， 浓度为0.05M ‑1.0M， 反应PH在6.5 ‑8.0； L‑天冬氨酸浓度为0.5M ‑1.0M， α‑酮戊二 酸浓度为5mM ‑50mM。 8.一种基于权利要求1～7中任意一项所述的肝功三联检测试卡的制备方法， 其特征在 于： 反应层(34)的制作； 辅助层(33)的处理； 整体装配， 首先在底 座(2)上对应位置粘贴四组 空白的反应层(34)， 分别将 谷丙转氨酶检测单元、 谷草转氨酶检测单元、 白蛋白检测单元定 量喷涂在 对应的反应层(34)上， 所述空白检测单元反应膜 也无反应液， 将喷涂好的底 座(2) 放置37°烘箱烘干， 制得反应层(34)。 9.根据权利要求8所述的肝功三联检测试卡的制备方法， 其特征在于： 将谷丙转氨酶底 物试剂浸润辅助层(33)后在37 °条件下烘干制备， 制备成谷丙转氨酶的辅助层(33)； 将 谷草 转氨酶底物试剂浸润辅助膜后在37 °条件下烘干制备， 制备成谷草转氨酶的辅助层(33)， 白 蛋白检测单 元、 空白检测单 元的辅助层(3 3)不做处 理。 10.根据权利要求9所述的肝功三联检测试卡的制备方法， 其特征在于： 将喷涂有三个 单元反应层(34)的烘干好的底座(2)放置平台上， 按照辅助层(33)、 滤血层(32)、 扩散层 (31)顺序 依次叠放在底 座(2)对应单元反应层(34)上， 将制备好的三个检测单元(3)放置底 座(2)对应的测试孔 位置上， 将压 板(1)压紧， 制成肝功三联检测试卡。权　利　要　求　书 2/2 页 3 CN 115219485 A 3