ICS 62.120 B 20 备案号：33839-2012 湖 北 DB42 省 地 方 标 准 DB42/T 808—2012 饲料中黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮、 赭曲霉毒素 A 和桔霉素的测定 高效液相色谱法 Determination of aflatoxin B1, zearalenone, ochratoxin A and citrinin in feed HPLC method 2012 - 03 - 01 发布 湖北省质量技术监督局 2012 - 05 - 01 实施 发 布 DB42/T 808—2012 目 次 前言 .................................................................................................................................................................... II 1 范围 .............................................................................................................................................................. 1 2 规范性引用文件 .......................................................................................................................................... 1 3 原理 .............................................................................................................................................................. 1 4 试剂与材料 .................................................................................................................................................. 1 5 仪器与设备 .................................................................................................................................................. 2 6 采样 .............................................................................................................................................................. 3 7 试样制备 ...................................................................................................................................................... 3 8 分析步骤 ...................................................................................................................................................... 3 8.1 提取与净化 ........................................................................................................................................... 3 8.2 测定 ....................................................................................................................................................... 3 附录 A（资料性附录） 标准工作液色谱图（四通道） ............................................................................ 5 图 A.1 图 A.2 图 A.3 图 A.4 黄曲霉毒素 B1 标准工作液的色谱图........................................................................................... 5 玉米赤霉烯酮标准工作液的色谱图 ............................................................................................. 5 赭曲霉毒素标准工作液的色谱图 ................................................................................................. 5 桔霉素标准工作液的色谱图 ......................................................................................................... 5 附录 B（资料性附录） 标准工作液色谱图（程序波长）......................................................................... 6 图 B.1 黄曲霉毒素 B1，玉米赤霉烯酮，赭曲霉毒素和桔霉素标准工作液的色谱图 ........................ 6 I DB42/T 808—2012 前 言 本标准按照GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利，本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由湖北省农业科学院提出并归口。 本标准起草单位：湖北省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、华中农业大学、重庆市畜牧 科学院。 本标准主要起草人：胡定金、周有祥、彭祥伟、李书谦、王小红、陈建彪、路 磊、董丽娜、夏 虹、 解华东。 II DB42/T 808—2012 饲料中黄曲霉毒素 B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A 和桔霉素的测定 高效液相色谱法 1 范围 本标准规定了饲料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素的高效液相色谱测定的 原理、试剂与材料、仪器与设备、采样、试验制备及分析步骤。 本标准适用于湖北省畜禽配合饲料、饲用谷物原料中黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A 和桔霉素的测定。 本标准的方法检测限：黄曲霉毒素B1为8 μg/kg，玉米赤霉烯酮为260 μg/kg，赭曲霉毒素A为10 μg/kg，桔霉素为25 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料 采样 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 原理 试样中的黄曲霉毒素B1、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素A和桔霉素，经乙腈-水酸性溶液提取，浓缩至 干，以正己烷除杂，乙腈定容，通过带有荧光检测器的液相色谱系统分析，保留时间定性，外标法定量。 4 试剂与材料 除非另有说明，在分析中仅使用确认为分析纯的试剂和GB/T 6682中规定的二级水。 4.1 乙腈：色谱纯。 4.2 磷酸：85%（质量分数）。 4.3 冰乙酸。 4.4 正己烷。 4.5 无水硫酸镁。 4.6 氯化钠。 4.7 次氯酸钠：化学纯。 4.8 黄曲霉毒素 B1 标准品：纯度≥98%。 4.9 玉米赤霉烯酮标准品：纯度≥98%。 4.10 赭曲霉毒素 A 标准品：纯度≥98%。 4.11 桔霉素标准品：纯度≥98%。 1 DB42/T 808—2012 4.12 黄曲霉毒素 B1 标准储备溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素 B1 标准品（4.8），用乙腈（4.1）配 制成 1.0×10-2 g/L 的黄曲霉毒素 B1 标准储备液，避光保存于 4℃冰箱备用。 4.13 玉米赤霉烯酮标准储备溶液：准确称取适量的玉米赤霉烯酮标准品（4.9），用乙腈（4.1）配制 成 5.0×10-2 g/L 的玉米赤霉烯酮标准储备液，避光保存于 4℃冰箱备用。 4.14 赭曲霉毒素 A：准确称取适量的赭曲霉毒素 A 标准品（4.10），用乙腈（4.1）配制成 1.0×10-2 g/L 的赭曲霉毒素 A 标准储备液，避光保存于 4℃冰箱备用。 4.15 桔霉素标准储备液：准确称取适量的桔霉素标准品（4.11），用乙腈（4.1）配制成 5.0×10-2 g/L 的桔霉素标准储备液，避光保存于 4℃冰箱备用。 4.16 混合标准溶液工作液 取适量四种标准储备液至10 mL容量瓶（5.8）中，加乙腈（4.1）稀释至刻度，现配现用，按照表1 规定进行。 表1 真菌毒素混合标准溶液 （单位为克每升） 项目名称 标准溶液1 黄曲霉毒素 B1 5.0×10 玉米赤霉烯酮 -5 标准溶液2 -4 标准溶液3 -4 标准溶液4 标准溶液5 -4 4.0×10-4 1.0×10 1.5×10 2.0×10 5.0×10-4 1.0×10-3 1.5×10-3 2.0×10-3 4.0×10-3 赭曲霉毒素 A 5.0×10-5 1.0×10-4 1.5×10-4 2.0×10-4 4.0×10-4 桔霉素 2.5