2 0 2 3 0 4 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 8 0 1 － － 实 施 食 用 菌 中 粗 多 糖 的 测 定 分 光 光 度 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 1 6 7 6 — 2 0 2 3 D e t e r m i n a t i o n o f c r u d e p o l y s a c c h a r i d e s i n e d i b l e m u s h r o o m — S p e c t r o p h o t o m e t r i c m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布 代 替 N Y / T 1 6 7 6 — 2 0 0 8NY/T１６７６—２０２３ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 本文件代替NY/T１６７６—２００８«食用菌中粗多糖含量的测定»,与NY/T１６７６—２００８相比,除结构调 整和编辑性改动外,主要变化如下: a)　更改了“范围”中适用范围的表述,将“食用菌制品”明确为“片菇、碎菇、干菇、菇粉等初加工制品” (见第１章,２００８年版第１章); b)　增加了规范性引用文件“GB/T１２７２８　食用菌术语”(见第２章,２００８年版第２章); c)　多糖提取方法由沸水提取法改为微波提取法(见７􀆰３); d)　样品前处理步骤由先去除单(二)糖再提取多糖改为先提取多糖再去除单(二)糖(见７􀆰４). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出. 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口. 本文件起草单位:上海市农业科学院、农业农村部食用菌产品质量监督检验测试中心(上海)、江苏安 惠生物科技有限公司、上海沛元农业发展有限公司、上海科立特农产品检测技术服务有限公司. 本文件主要起草人:赵晓燕、雷萍、周昌艳、张艳梅、陈惠、庞小博、刘海燕、门殿英、吴伟杰、陈磊、赵志 勇、鄂恒超、李晓贝、范婷婷、董慧、白冰、何香伟、李健英、黄柳娟、黄甜甜. 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———２００８年首次发布为NY/T１６７６—２００８; ———本次为首次修订. ⅠNY/T１６７６—２０２３ 食用菌中粗多糖的测定　分光光度法 １　范围 本文件规定了食用菌中粗多糖含量的分光光度测定方法. 本文件适用于各种食用菌鲜品及干菇、片菇、碎菇、菇粉等初加工制品中粗多糖含量的测定;不适用于 添加淀粉、糊精组分的食用菌产品,以及食用菌液体发酵或固体发酵等产品的测定. 本文件粗多糖线性含量范围为１􀆰０g/１００g~５０g/１００g.当含量超范围时,可酌情减少称样量或加 大提取液定容体积. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T１２７２８　食用菌术语 NY/T３３０４　农产品检测样品管理技术规范 ３　术语和定义 GB/T１２７２８界定的以及下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１　 粗多糖　crudepolysaccharides 以βＧDＧ葡聚糖或αＧDＧ葡聚糖或其他碳糖为主链的一系列高分子化合物. ４　原理 多糖经微波加热提取后,醇沉去除单(二)糖.多糖在硫酸作用下,先水解成单糖,并迅速脱水生成糖 醛衍生物,与苯酚反应生成橙黄色物质,该物质在４９０nm处有特征吸收,与标准曲线比较定量. ５　试剂与材料 ５􀆰１　除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯试剂,实验室用水符合GB/T６６８２中三级水的规定. ５􀆰２　试剂 ５􀆰２􀆰１　硫酸(H２SO４,CAS号:７６６４Ｇ９３Ｇ９),ρ＝１􀆰８４g/mL. ５􀆰２􀆰２　无水乙醇(C２H６O,CAS号:６４Ｇ１４Ｇ５). ５􀆰２􀆰３　苯酚(C６H６O,CAS号:１０８Ｇ９５Ｇ２),重蒸馏. ５􀆰３　溶液配制 ５􀆰３􀆰１　８０％苯酚溶液:称取８０g苯酚(５􀆰２􀆰３)于１００mL烧杯中,加水溶解,定容至１００mL后转至棕色 瓶中,置于４℃冰箱中避光储存. ５􀆰３􀆰２　５％苯酚:吸取１mL苯酚溶液(５􀆰３􀆰１),加１５mL水摇匀,现用现配. ５􀆰４　标准品 葡萄糖(C６H１２O６,CAS号:５８３６７Ｇ０１Ｇ４),使用前应于１０３℃恒温烘干至恒重. ５􀆰５　标准溶液配制 葡萄糖标准溶液(１００mg/L):称取０􀆰１００００g葡萄糖(５􀆰４)于１００mL烧杯中,加水溶解,定容至 １NY/T１６７６—２０２３ １０００mL,置于４℃冰箱中储存,有效期６０d. ６　仪器和设备 ６􀆰１　可见分光光度计. ６􀆰２　电子天平,感量０􀆰０００１g和０􀆰００００１g. ６􀆰３　微波消解仪,配置不小于５０mL的聚四氟乙烯消解内罐. ６􀆰４　离心机,转速不低于５０００r/min. ６􀆰５　控温电热板. ６􀆰６　恒温水浴锅. ６􀆰７　均质机. ６􀆰８　粉碎机. ６􀆰９　标准筛:４２５μm(４０目). ６􀆰１０　涡旋混合器. ６􀆰１１　快速滤纸. ７　分析步骤 ７􀆰１　菇粉样品中有无淀粉、糊精的判定 按附录A进行判定.若菇粉样品中含有淀粉、糊精,则本方法不适用于该样品的测定.若不含淀粉、 糊精,则进行下一个测定步骤. ７􀆰２　试样制备 ７􀆰２􀆰１　鲜样 按照NY/T３３０４进行制备.取不少于１０００g食用菌鲜样,用干净纱布轻轻擦去表面附着物,切碎 后,放置于均质机(６􀆰７)中粉碎,于密封容器中－１８℃保存备用,试样有效期为２０d.使用前置于室温解 冻后重新使用均质机(６􀆰７)匀浆. ７􀆰２􀆰２　干样 按照NY/T３３０４进行制备.取不少于２００g食用菌干样,先取部分放置于粉碎机(６􀆰８)中粉碎,弃 去,剩余部分再放置于粉碎机(６􀆰８)中粉碎,全部过４２５μm标准筛(６􀆰９),制成待测样,于密封容器中常温 保存备用. ７􀆰３　提取 ７􀆰３􀆰１　鲜样 称取２g~５g(精确至０􀆰００１g)试样于微波消解仪(６􀆰３)底部,加入１５mL水,涡旋混合器(６􀆰１０)混合 均匀后,１４０℃微波提取２h. ７􀆰３􀆰２　干样 称取０􀆰２g~０􀆰５g(精确至０􀆰０００１g)试样于微波消解仪(６􀆰３)底部,加入２０mL水,涡旋混合器 (６􀆰１０)混合均匀,４℃冷藏过夜后,涡旋混合器(６􀆰１０)再次混合均匀,１４０℃微波提取２h. ７􀆰４　去除单(二)糖 将微波提取液趁热转移至２５０mL烧杯,微波管内加水加塞振摇洗涤３次~４次,每次加水２０mL~ ３０mL,洗涤液并入烧杯.在烧杯内放置一根玻璃搅拌棒以防止溶液在加热过程中飞溅,将烧杯置于电热 板上加热至微沸并保持,直至烧杯内无液体流动(防止烧干烧焦),立即取下,加５mL水,搅拌至均匀分散 状态.溶液冷却至室温后缓慢加入７５mL无水乙醇,边加边轻轻搅拌３０s.将烧杯覆膜后置于４℃冰箱 放置１２h.将烧杯内容物转移至离心管,５０００r/min条件下离心１０min,弃去上清液,沉淀物转移至原烧 杯,洗涤离心管,洗涤液并入烧杯内.将烧杯置于电热板上加热搅拌至沉淀物分散均匀,转移至２５０mL 容量瓶中,冷却后加水定容,摇匀,快速滤纸过滤,弃去初始的１０mL~１５mL滤液,收集２０mL~３０mL ２NY/T１６７６—２０２３ 滤液,待测. ７􀆰５　标准曲线 分别吸取０mL、０􀆰２mL、０􀆰４mL、０􀆰６mL、０􀆰８mL、１􀆰０mL葡萄糖标准溶液(５􀆰５)置于２５mL试管 中,加水至１􀆰０mL,再加入１mL５％苯酚溶液(５􀆰３􀆰２)摇匀,用移液器准确快速加入５mL硫酸(５􀆰２􀆰１) (与液面垂直加入,勿接触试管壁,以便与反应液充分混合),静置１０min后,涡旋均匀,置于３０℃水浴中 ２０min后,４９０nm测定吸光值.以吸光值为纵坐标,以葡萄糖质量(μg)为横坐标,绘制标准曲线. ７􀆰６　测定 吸取０􀆰２mL~１􀆰０mL待测液,测定同７􀆰５.同时做试剂空白(不称取样品,步骤同７􀆰３、７􀆰４),并根据 样品提取液的吸光度(扣除试剂空白吸光度)计算粗多糖含量. ８　结果计算 样品中粗多糖含量按公式(１)计算. X＝m１×V１ m２×V２×０􀆰９×１ １０６×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: X———试样中粗多糖含量的数值,单位为克每百克(g/１００g); m１———标准曲线对应样品测定液中含糖量的数值,单位为微克(g); V１———样品定容体积的数值,单位为毫升(mL); V２———比色测定时所移取样品测定液的体积的数值,单位为毫升(mL); m２———样品质量的数值,单位为克(g); ０􀆰９———葡萄糖换算成葡聚糖的校正系数; １０６———换算系数. 计算结果以重复性条件下获得的２次独立测定结果的算术平均值表示,结果保留３位有效数字. ９　精密度 粗多糖含量小于或等于１５％时,在重复性条件下获得的２次独立测试结果的绝对差值不得超过算术 平均值的１８％; 粗多糖含量大于１５％时,在重复性条件下获得的２次独立测试结果的绝对差值不得超过算术平均值 的１０％. ３NY/T１６７６—２０２３ 附　录　A (规范性) 菇粉样品中淀粉、糊精的定性鉴