2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 化 学 农 药 鸟 类 急 性 经 口 毒 性 试 验 准 则 第 1 部 分 ： 序 贯 法 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 5 0 C C S B 4 1 9 4 . 1 — 2 0 2 2 C h e m i c a l p e s t i c i d e — G u i d e l i n e f o r a v i a n a c u t e o r a l t o x i c i t y t e s t — P a r t 1 : S e q u e n t i a l p r o c e d u r e Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４１９４􀆰１—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. NY/T４１９４«化学农药鸟类急性经口试验准则»分为２个部分: ———第１部分:序贯法; ———第２部分:经典剂量效应法. 本文件是NY/T４１９４«化学农药　鸟类急性经口试验准则»的第１部分. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件负责起草单位:农业农村部农药检定所. 本文件主要起草人:周艳明、袁善奎、刘伟、单炜力、周欣欣、陈朗、蓝帅. ⅠNY/T４１９４􀆰１—２０２２ 化学农药　鸟类急性经口毒性试验准则 第１部分:序贯法 １　范围 本文件规定了用序贯法测定鸟类急性经口毒性的试验方法. 本文件适用于化学农药,生物化学农药和植物源农药可参照执行,不适用于微生物农药. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. NY/T２８８２􀆰３　农药登记　环境风险评估指南　第３部分:鸟类 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 逆转　reversal 在２个相邻的处理组中,低剂量处理组的死亡率高于高剂量处理组死亡率的现象. ３􀆰２ 部分死亡　partialkill 多只受试鸟给予同样剂量的被试物,死亡率介于０％~１００％的现象. ４　试验概述 试验由多个阶段组成,每个阶段将被试物按设计剂量经口灌喂至受试鸟嗉囊或腺胃.给药后,观察 １４d,通常根据给药后３d各处理组受试鸟的死亡情况估算半致死剂量(LD５０)并设置下一阶段的试验剂 量.以全部阶段的试验结果计算被试物对受试鸟的LD５０、置信区间和剂量－效应曲线斜率. ５　试验方法 ５􀆰１　受试鸟选择 受试鸟应满足以下要求: ———物种宜选择吐食习性低的鸟类,如鸡形目的日本鹌鹑(Coturnixjaponica)或山齿鹑(Colinus virginianus);为开展物种敏感性分布或在风险评估中使用毒性终点的几何平均值,可选择雁形目的绿头 鸭(Anasplatyrhynchos)、鸽形目的原鸽(Columbalivia)、雀形目的斑胸草雀(Taeniopygiaguttata,曾用 名:Poephilaguttata)、鹦形目的虎皮鹦鹉(Melopsittacusundulatus)等鸟类; ———受试鸟在本实验室中的自然死亡率应≤１％; ———应选择人工繁育的鸟类,不应使用野生鸟类; ———受试鸟应为不处于繁殖期的成鸟; ———宜使用野生表型的鸟类,不能使用野生表型时应选择不同表型杂交的鸟类; ———受试鸟应为同一来源、同一繁殖种群,宜定期远亲交配以保持遗传异质性; ———受试鸟日龄应大致相同. 试验可使用单一性别受试鸟,也可混用雌鸟和雄鸟.对于可能导致雌雄鸟类敏感性差异的被试物,试 验设计应能分别计算对雌性和雄性的LD５０. １NY/T４１９４􀆰１—２０２２ ５􀆰２　受试鸟驯养和试验条件 ５􀆰２􀆰１　每处理１只受试鸟时,应单笼饲养;每处理多只受试鸟时,至少在给药后前３d应单笼饲养以便观 察并记录每只受试鸟的症状.对斑胸草雀等群居物种,鸟笼应紧靠在一起,其他物种也宜将鸟笼紧靠在一 起,除非鸟表现出攻击行为.每只鸟最小栖息面积为:原鸽３３３３cm２、绿头鸭２０００cm２、日本鹌鹑和山齿 鹑１０００cm２、斑胸草雀和虎皮鹦鹉５００cm２.鸟笼底部应为网状结构,网眼大小应能使粪便落下且不应 影响鸟类活动.原鸽、斑胸草雀和虎皮鹦鹉的鸟笼中应设置栖木. ５􀆰２􀆰２　试验可在人工控制的环境下进行,也可在符合要求的温度和湿度下进行.日本鹌鹑、山齿鹑和绿 头鸭的试验温度应为１５℃~２７℃,但试验期间波动应尽可能小.鸟类饲养和观察室内应通风良好,空气 每小时至少交换１０次.日本鹌鹑、山齿鹑和绿头鸭每日光照时间为８h,其他鸟类可延长至１０h.应提供 充足的饲料和水,并及时更换.可使用商品饲料和维生素,但应符合所用物种的营养需求.试验期间和给 药前１４d应避免药物治疗.饲料和水应定期测定重金属(如砷、镉、铅、汞、硒等)和持久性农药(如有机氯 农药等)等污染物. ５􀆰３　受试鸟准备 每只受试鸟均应有单独标识.试验开始前应在试验条件下预养至少１４d,预养期间死亡率＞５％的鸟 类不应用于试验. ５􀆰４　给药 ５􀆰４􀆰１　被试物置于胶囊中或溶解、分散于合适的载体后,经口灌喂至受试鸟嗉囊或腺胃;对于液体制剂, 也可直接经口灌喂至受试鸟嗉囊或腺胃.当被试物可被水溶解或分散时,应首先考虑使用水作为载体,其 次可考虑溶解或乳化于玉米油等食用油中,均不可行时再考虑其他载体.使用水以外的载体时,应了解载 体的毒性,载体不应引起吐食. 注:可用食用色素亮蓝(CAS:３８４４Ｇ４５Ｇ９)等与粪便颜色明显不同的无毒染料使饲料染色,以观察是否出现吐食现象. 吐食可能与给药技术或被试物性质有关,减少给药体积、使用胶囊或更换载体可能消除或降低吐食频率.特别是 使用雀形目鸟类时,宜先进行预试验来评估受试鸟的吐食习性,如果仍然存在吐食现象应考虑更换另一种鸟类. 受试鸟存在吐食现象时不能精确计算出LD５０,仅能得出被试物的LD５０大于引发吐食和死亡的最低剂量. ５􀆰４􀆰２　每只受试鸟的给药剂量应根据给药前２４h内该鸟所测个体体重确定.给药体积应尽量小,不应 超过１mL/１００g体重,处理组和对照组的所有受试鸟的给药体积/体重比应相同.给药前一晚受试鸟应 禁食１２h~１５h,日本鹌鹑等较大的受试鸟宜整夜禁食,体重≤５０g的受试鸟应禁食２h. ５􀆰５　观察 ５􀆰５􀆰１　给药后按以下要求确定观察频率和时间: ———给药后０h~２h应持续观察受试鸟的中毒症状及是否出现吐食; ———给药后２h~１d应在光照期内至少等间隔观察３次中毒症状; ———给药后１d~１４d每日应至少观察１次中毒症状; ———给药后１４d仍能观察到中毒症状或死亡时,应延长观察时间至无中毒症状,某一试验阶段延长 观察时间,后续试验阶段也应延长观察时间. ５􀆰５􀆰２　应观察记录每只受试鸟的吐食、中毒症状及缓解表现、异常行为、体重,受试鸟出现死亡时应记录 死亡时间. ５􀆰５􀆰３　物理损伤等明显不是被试物导致的偶然死亡应在结果计算中排除.对照组出现偶然死亡时,应增 加对照组的受试鸟数量. ５􀆰５􀆰４　应在给药前及给药后３d、７d和１４d测定受试鸟的体重;给药后０d~３d应每日测定食物消耗 量,其后应测定３d~７d和７d~１４d的食物消耗量.若延长观察时间,最后一次体重和食物消耗量应在 试验结束时测定.所有死亡受试鸟应进行大体解剖、试验结束时对处理组和对照组的未死亡受试鸟进行 大体解剖以鉴别偶然死亡和中毒症状,处理组和对照组均未出现死亡和明显中毒症状时可不解剖. ５􀆰５􀆰５　试验期间,按附录A判断受试鸟状态,其有明显疼痛或处于濒死状态时,经试验项目负责人评估 继续观察不能得出对试验有用的信息时,应实施安乐死并计入死亡数. ２NY/T４１９４􀆰１—２０２２ ６　试验程序 ６􀆰１　限度试验 ６􀆰１􀆰１　对毒性可能较低的被试物,宜开展限度试验.按NY/T２８８２􀆰３计算出的鸟类PEDacute的１０倍或 ２０００mg被试物/kg体重(取高值)设置限度试验剂量,处理组和对照组各５只鸟,给药后观察１４d.若处 理组受试鸟均未死亡,表明在９５％置信水平下被试物的LD５０＞限度剂量,试验可终止.限度试验的流程 按附录B的B􀆰１操作. ６􀆰１􀆰２　若处理组中有１只受试鸟死亡,其他受试鸟未出现中毒症状,可再用５只鸟按限度剂量给药并 观察１４d.第２次限度剂量给药或序贯法试验可在１４d观察期内开始.若整个处理组１０只受试鸟中 仅有１只死亡且其他受试鸟未出现中毒症状,表明在９５％置信水平下被试物的LD５０＞限度剂量,试验 可终止.经试验项目负责人和委托方协商也可不进行第２次限度剂量给药,直接进行序贯法试验第２ 阶段试验. ６􀆰１􀆰３　若处理组受试鸟全部死亡,进行序贯法试验的第１阶段试验. ６􀆰１􀆰４　若５只受试鸟的处理组中有１只受试鸟死亡且其余受试鸟出现中毒症状,或有２只~４只受试鸟 死亡,或１０只受试鸟的处理组中出现２只或２只以上死亡时,进行序贯法试验的第２阶段试验.按附录 C估算LD５０,当限度剂量为２０００mg被试物/kg体重时可按表１估算. 表１　根据限度试验死亡率估算LD５０ 死亡率,％ １０