2 0 2 2 1 1 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 3 0 1 － － 实 施 化 学 农 药 鸟 类 急 性 经 口 毒 性 试 验 准 则 第 2 部 分 ： 经 典 剂 量 效 应 法 1 7 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 5 0 C C S B 4 1 9 4 . 2 — 2 0 2 2 C h e m i c a l p e s t i c i d e — G u i d e l i n e f o r a v i a n a c u t e o r a l t o x i c i t y t e s t — P a r t 2 : C l a s s i c a l d o s e - r e s p o n s e m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４１９４􀆰２—２０２２ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. NY/T４１９４«化学农药　鸟类急性经口试验准则»分为２个部分: ———第１部分:序贯法; ———第２部分:经典剂量效应法. 本文件是NY/T４１９４«化学农药　鸟类急性经口试验准则»的第２部分. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:农业农村部农药检定所. 本文件主要起草人:周艳明、袁善奎、刘伟、单炜力、周欣欣、陈朗、蓝帅. ⅠNY/T４１９４􀆰２—２０２２ 化学农药　鸟类急性经口毒性试验准则 第２部分:经典剂量效应法 １　范围 本文件规定了用经典剂量效应法测定鸟类急性经口毒性的试验方法. 本文件适用于化学农药,生物化学农药和植物源农药可参照执行,不适用于微生物农药. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. NY/T２８８２􀆰３　农药登记环境风险评估指南　第３部分:鸟类 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　试验概述 将被试物按设计剂量经口灌喂至受试鸟嗉囊或腺胃,定期观察受试鸟的中毒与死亡情况,计算被试物 对受试鸟的半致死剂量(LD５０)、置信区间和剂量Ｇ效应曲线斜率. ５　试验方法 ５􀆰１　受试鸟选择 受试鸟应满足以下要求: ———物种宜选择吐食习性低的鸟类,如鸡形目的日本鹌鹑(Coturnixjaponica)或山齿鹑(Colinus virginianus);为开展物种敏感性分布或在风险评估中使用毒性终点的几何平均值,可选择雁形目的绿头 鸭(Anasplatyrhynchos)、鸽形目的原鸽(Columbalivia)、雀形目的斑胸草雀(Taeniopygiaguttata,曾用 名:Poephilaguttata)、鹦形目的虎皮鹦鹉(Melopsittacusundulatus)等鸟类; ———受试鸟在本实验室中的自然死亡率应≤１％; ———应选择人工繁育的鸟类,不应使用野生鸟类; ———受试鸟应为不处于繁殖期的成鸟; ———宜使用野生表型的鸟类,不能使用野生表型时应选择不同表型杂交的鸟类; ———受试鸟应为同一来源、同一繁殖种群,宜定期远亲交配以保持遗传异质性; ———受试鸟的日龄应大致相同(±１周); ———所有受试鸟的体重不应超过受试鸟平均体重的±１０％. ５􀆰２　受试鸟驯养和试验条件 ５􀆰２􀆰１　对斑胸草雀等群居物种,鸟笼应紧靠在一起,其他物种也宜将鸟笼紧靠在一起,除非鸟表现出攻击 行为.每只鸟最小栖息面积为:原鸽３３３３cm２、绿头鸭２０００cm２、日本鹌鹑、山齿鹑、斑胸草雀和虎皮鹦 鹉５００cm２.鸟笼底部应为网状结构,网眼大小应能使粪便落下且不应影响鸟类活动.原鸽、斑胸草雀和 虎皮鹦鹉的鸟笼中应设置栖木. ５􀆰２􀆰２　试验可在人工控制的环境下进行,也可在符合要求的温度和湿度下进行.日本鹌鹑、山齿鹑和绿 头鸭的试验温度应为１５℃~２７℃、相对湿度应为４５％~７０％,但试验期间波动应尽可能小.受试鸟饲养 １NY/T４１９４􀆰２—２０２２ 和观察室内应通风良好,空气每小时至少交换１０次.日本鹌鹑、山齿鹑和绿头鸭每日光照时间为８h,其 他鸟类可延长至１０h.应提供充足的饲料和水,并及时更换.可使用商品饲料和维生素,但应符合所用 物种的营养需求.试验期间和给药前１４d应避免药物治疗.饲料和水应定期测定重金属(如砷、镉、铅、 汞、硒等)和持久性农药(如有机氯农药等)等污染物. ５􀆰３　受试鸟准备 每只受试鸟均应有单独标识.试验开始前应在试验条件下预养至少１４d,预养期间死亡率＞５％的鸟 类不应用于试验. ５􀆰４　受试鸟数量 ５􀆰４􀆰１　正式试验和限度试验中,处理组和对照组每组至少使用１０只鸟,通常雌雄各半.当研究被试物的 化学特异性和部位特异性时,可在完成常规试验的基础上额外开展试验并根据研究目的确定受试鸟的性 别和年龄(例如,农药使用方法导致繁殖期雌鸟的风险不可接受,可考虑采用该生长阶段的雌鸟开展试 验).每个处理组(含对照组)应使用同样数量的受试鸟. ５􀆰４􀆰２　受试鸟应随机分配至各处理组和对照组.同一处理组(含对照组)的受试鸟宜按性别分两笼饲养. 随机分配宜在给药前称重时进行,也可在驯养前进行. ５􀆰５　给药 ５􀆰５􀆰１　被试物置于胶囊中或溶解、分散于合适的载体后,经口灌喂至受试鸟嗉囊或腺胃;对于液体制剂, 也可直接经口灌喂至受试鸟嗉囊或腺胃.当被试物可被水溶解或分散时,应首先考虑使用水作为载体,其 次可考虑溶解或乳化于玉米油等食用油中,均不可行时再考虑其他载体.使用水以外的载体时,应了解载 体的毒性,载体不应引起吐食. 注:可用食用色素亮蓝(CAS:３８４４Ｇ４５Ｇ９)等与粪便颜色明显不同的无毒染料使饲料染色,以观察是否出现吐食现象. 吐食可能与给药技术或被试物性质有关,减少给药体积、使用胶囊或更换载体可能消除或降低吐食频率.特别是 使用雀形目鸟类时,宜先进行预试验来评估受试鸟的吐食习性,如果仍然存在吐食现象应考虑更换另一种鸟类. 受试鸟存在吐食现象时不能精确计算出LD５０,仅能得出被试物的LD５０大于引发吐食和死亡的最低剂量. ５􀆰５􀆰２　每只鸟的给药剂量应根据给药前２４h内该鸟所测个体体重确定.给药体积应尽量小,不应超过 １mL/１００g体重,处理组和对照组的所有受试鸟的给药体积/体重比应相同.给药前一晚受试鸟应禁食 １２h~１５h,日本鹌鹑等较大的受试鸟宜整夜禁食,体重≤５０g的受试鸟应禁食２h. ５􀆰６　观察 ５􀆰６􀆰１　给药后按以下要求确定观察频率和时间: ———给药后０h~２h应持续观察受试鸟的中毒症状及是否出现吐食; ———给药后２h~１d应在光照期内至少等间隔观察３次中毒症状; ———给药后１d~１４d每日应至少观察１次中毒症状; ———给药后１４d仍能观察到中毒症状或死亡时,应延长观察时间至无中毒症状. ５􀆰６􀆰２　应观察记录每只受试鸟的吐食、中毒症状及缓解表现、异常行为、体重,受试鸟出现死亡时应记录 死亡时间. ５􀆰６􀆰３　物理损伤等明显不是被试物导致的偶然死亡应在结果计算中排除. ５􀆰６􀆰４　应在给药前(确定给药剂量时)及给药后３d、７d和１４d测定受试鸟的体重;给药后０d~３d应每 日测定食物消耗量,其后应测定３d~７d和７d~１４d的食物消耗量.若延长观察时间,最后１次体重和 食物消耗量应在试验结束时测定.建议给药前７d额外测定１次受试鸟体重以提供基线数据. ５􀆰６􀆰５　所有死亡受试鸟应进行大体解剖,试验结束时还应从处理组未死亡受试鸟中随机选取足够数量进 行大体解剖.对照组未死亡受试鸟应至少随机选择３只进行大体解剖.处理组和对照组均未出现死亡和 明显中毒症状时可不解剖. ５􀆰６􀆰６　试验期间,按附录A判断受试鸟状态,其有明显的疼痛或处于濒死状态时,经试验项目负责人评 估继续观察不能得出对试验有用的信息时,应实施安乐死并计入死亡数. ２NY/T４１９４􀆰２—２０２２ ６　试验程序 ６􀆰１　预试验 应开展预试验确定正式试验的给药剂量,当已知被试物的大致毒性时可不开展预试验.按正式试验 的条件,用少量受试鸟以较大的间距设置３个~５个处理组,建议设置为２mg被试物/kg体重、２０mg被 试物/kg体重、２００mg被试物/kg体重和２０００mg被试物/kg体重,给药后观察并记录鸟类中毒症状和 死亡情况. ６􀆰２　正式试验 正式试验应至少设置５个处理组和１个对照组.处理组应按一定的几何级数设置,以充分描述整个 剂量Ｇ效应曲线.至少应有３个处理组的受试鸟死亡率介于０％~１００％.给药后观察(见５􀆰６)并记录受 试鸟中毒症状和死亡情况. ６􀆰３　限度试验 对毒性可能较低的被试物,宜开展限度试验.限度试验设置１个处理组和１个对照组.限度剂量为 ２０００mg被试物/kg体重或按NY/T２８８２􀆰３计算出的鸟类PEDacute的１０倍(取高值).给药后观察(见 ５􀆰６)并记录受试鸟中毒症状和死亡情况.若处理组受试鸟均未死亡,表明在９５％置信水平下被试物的 LD５０＞限度剂量,试验可终止. ７　数据处理 ７􀆰１　环境条件 应计算试验期间温度和湿度的平均值、标准偏差、相对标准偏差、最小值和最大值. ７􀆰２　死亡数 应以表格形