2 0 2 3 0 2 1 7 发 布 － － 2 0 2 3 0 6 0 1 － － 实 施 植 物 油 中 2 , 6 - 二 甲 氧 基 - 4 - 乙 烯 基 苯 酚 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 3 0 5 — 2 0 2 3 D e t e r m i n a t i o n o f 2 , 6 - d i m e t h o x y - 4 - v i n y l p h e n o l i n v e g e t a b l e o i l s — H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４３０５—２０２３ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件由农业农村部乡村产业发展司提出. 本文件由农业农村部农产品加工标准化技术委员会归口. 本文件起草单位:中国农业科学院油料作物研究所、天津市农业科学院、农业农村部农产品及加工品 质量监督检验测试中心(天津). 本文件主要起草人:黄凤洪、郑畅、李文林、刘昌盛、万楚筠、周琦、张强、魏芳、郑明明、刘征辉、陈秋生. ⅠNY/T４３０５—２０２３ 植物油中２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚的测定 高效液相色谱法 １　范围 本文件规定了植物油、植物调和油中２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚的高效液相色谱测定方法. 本文件适用于植物油、植物调和油中２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚的测定. 本文件方法的检出限为１􀆰１０mg/kg,定量限为３􀆰２０mg/kg. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件,仅 该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本文件. GB/T６０３　化学试剂试验方法中所用制剂及制品的制备 GB/T５５２４　动植物油脂　扦样 GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　原理 植物油中的２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚经甲醇和正己烷混合溶液提取后,用配置有二极管阵列检测 器高效液相色谱仪测定,保留时间定性,外标法定量. ４　试剂和材料 除另有说明外,所用试剂均为分析纯.所用水为GB/T６６８２规定的一级水,使用前煮沸１０min后冷 却.所用器皿用水洗净后在于１００℃烘箱内烘１h~２h. ４􀆰１　甲醇(色谱纯) ４􀆰２　正己烷 ４􀆰３　乙酸 ４􀆰４　１％乙酸水:准确吸取１􀆰０mL乙酸(４􀆰３)加水至１００mL. ４􀆰５　甲醇＋水(８０＋２０):取８０mL甲醇(４􀆰１)加２０mL水,混匀. ４􀆰６　２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚(C１０H１２O３,CAS号:２８３４３Ｇ２２Ｇ８):纯度≥９８％. ４􀆰７　２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚标准溶液配制: ４􀆰７􀆰１　标准储备溶液:精密称取１０􀆰０mg２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚(４􀆰６)标准品,加甲醇(４􀆰１)溶解,并 定容于１０mL棕色容量瓶中,配制成浓度为１􀆰０mg/mL的标准储备液,－２０℃以下避光保存. ４􀆰７􀆰２　标准工作溶液:分别吸取一定量的２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚标准储备液(４􀆰７􀆰１),用甲醇溶 液(４􀆰５)稀释得到浓度分别为５􀆰０μg/mL、１０􀆰０μg/mL、２０􀆰０μg/mL、５０􀆰０μg/mL、１００􀆰０μg/mL、 ２００􀆰０μg/mL和５００􀆰０μg/mL的标准工作溶液.现用现配. ５　仪器和设备 ５􀆰１　高效液相色谱仪:配有二极管阵列检测器(PDA)或紫外检测器(UVD). ５􀆰２　分析天平:感量０􀆰０００１g. ５􀆰３　离心机:转速不低于５０００r/min. ５􀆰４　涡旋振荡器. ５􀆰５　微孔滤膜:０􀆰２２μm,有机系. １NY/T４３０５—２０２３ ６　取样和试样保存 ６􀆰１　取样 取样按照GB/T５５２４的规定执行,实验室收到的样品应具有真实的代表性,且在运输和储藏过程中 未受到损害或变质. ６􀆰２　保存 试样于４℃以下冰箱中避光保存. ７　测定步骤 ７􀆰１　试样的制备 称取约１g(精确至０􀆰００１g)试样于１０mL离心管中,加入１􀆰５mL正己烷(４􀆰２)和１􀆰５mL甲醇溶液 (４􀆰５),涡旋提取５min,于５０００r/min离心５min保留下层萃取液,将上层溶液转移至另一１０mL离心管 中,上层溶液继续加甲醇溶液(４􀆰５),重复提取３次,合并下层萃取液,混匀,于５０００r/min离心５min,吸 取上层残留样液,将下层萃取液转移至１０mL容量瓶中,用甲醇溶液(４􀆰５)定容至刻度,摇匀,过膜,在 ４℃条件下储藏备用. ７􀆰２　测定条件 ７􀆰２􀆰１　液相色谱参考条件 色谱柱:C１８(内径４􀆰６mm,粒径５μm,柱长２５０mm); 流动相:A为甲醇(４􀆰１),B为１％乙酸水(４􀆰４); 流速:１􀆰０mL/min; 柱温:３０℃; 进样量:１０μL; 检测波长:２７０nm; 流动相梯度洗脱程序见表１. 表１　流动相梯度洗脱程序 时间,min 流动相A,％ 流动相B,％ ０ ３０ ７０ ５ ３６ ６４ ８ ４５ ５５ １２ ６５ ３５ １５ １０ ９０ １８ １０ ９０ ２０ ３０ ７０ ２５ ３０ ７０ ７􀆰３　色谱测定 超出线性范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析,标准曲线溶液中２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ 乙烯基苯酚的响应值均应在仪器检测的适宜范围内.以含量响应值的峰面积为纵坐标、２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ 乙烯基苯酚的含量为横坐标,绘制标准工作曲线.保留时间定性,外标法定量. ７􀆰４　结果计算和表述 按公式(１)计算试样中２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚的含量或采用色谱数据处理系统计算. X＝C×V m(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: X———试样中２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚含量的数值,单位为毫克每千克(mg/kg); C———从标准工作曲线得到的样液对应的２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚浓度的数值,单位为微克每毫 ２NY/T４３０５—２０２３ 升(μg/mL); V———样液最终定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———样液所代表的试样质量的数值,单位为克(g). 计算结果用平行测定的算术平均值表示,结果保留到小数点后２位. ８　精密度 在重复性条件下获得的２次独立测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的１０％. ３NY/T４３０５—２０２３ 附　录　A (资料性) 　 ２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚标准溶液色谱图见图A􀆰１. 图A􀆰１　２,６Ｇ二甲氧基Ｇ４Ｇ乙烯基苯酚标准溶液(１００μg/mL)色谱图 ４