2 0 2 3 0 4 1 1 发 布 － － 2 0 2 3 0 8 0 1 － － 实 施 大 蒜 及 其 制 品 中 水 溶 性 有 机 硫 化 合 物 的 测 定 液 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 3 5 1 — 2 0 2 3 D e t e r m i n a t i o n o f w a t e r - s o l u b l e o r g a n o s u l f u r c o m p o u n d s i n g a r l i c a n d i t s p r o d u c t s b y l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４３５１—２０２３ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部农产品质量安全监管司提出. 本文件由农业农村部农产品营养标准专家委员会归口. 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、山东省农业科学院农业质量标准 与检测技术研究所、江苏徐淮地区徐州农业科学研究所、全国蔬菜感官与营养品质研发中心、山东寿光检 测集团有限公司、山东寿光蔬菜种子检测有限公司、江苏福多美生物科技有限公司. 本文件主要起草人:翁瑞、钱永忠、刘平香、杨峰、樊继德、王仁杰、孙明、吴文广、程琳、张黎明、张燕、魏 美甜. ⅠNY/T４３５１—２０２３ 大蒜及其制品中水溶性有机硫化合物的测定 液相色谱Ｇ串联质谱法 １　范围 本文件规定了大蒜及其制品中水溶性有机硫化合物含量的液相色谱Ｇ串联质谱测定方法. 本文件适用于大蒜、蒜片及蒜粉中蒜氨酸、甲基蒜氨酸、γＧLＧ谷氨酰ＧSＧ甲基ＧLＧ半胱氨酸(GSMC)、γＧ 谷氨酰ＧSＧ烯丙基半胱氨酸(GSAC)、SＧ甲基ＧLＧ半胱氨酸(SMC)、SＧ烯丙基ＧLＧ半胱氨酸(SAC)、SＧ(反Ｇ１Ｇ丙 烯基)ＧLＧ半胱氨酸(SPC)含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 大蒜及其制品中的水溶性有机硫化合物经０􀆰１％甲酸水溶液提取,液相色谱－串联质谱法测定,外标 法定量. ５　试剂和材料 ５􀆰１　除非另有说明,所用试剂均为分析纯,水为GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰２　乙腈(C２H３N):色谱纯. ５􀆰３　甲醇(CH４O):色谱纯. ５􀆰４　甲酸(CH２O２):色谱纯. ５􀆰５　０􀆰１％甲酸水溶液:准确移取１mL甲酸(５􀆰３)至１０００mL容量瓶中,用水定容至刻度. ５􀆰６　０􀆰１％甲酸乙腈溶液:准确移取１mL甲酸(５􀆰３)至１０００mL容量瓶中,用乙腈(５􀆰１)定容至刻度. ５􀆰７　标准物质 ５􀆰７􀆰１　蒜氨酸(Alliin,C６H１１NO３S,CAS号:５５６－２７－４),纯度≥９８％或经国家认证并授予标准物质证 书的标准物质. ５􀆰７􀆰２　甲基蒜氨酸(Methiin,C４H９NO３S,CAS号:３２７２６－１４－０),纯度≥９８％或经国家认证并授予标准 物质证书的标准物质. ５􀆰７􀆰３　γＧLＧ谷氨酰ＧSＧ甲基ＧLＧ半胱氨酸(γＧGlutamylＧSＧmethylcysteine,GSMC,C９H１６N２O５S,CAS号: １９０４６Ｇ２２Ｇ１),纯度≥９８％或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰７􀆰４　γＧ谷氨酰ＧSＧ烯丙基半胱氨酸(γＧGlutamylＧSＧallylcysteine,GSAC,C１１H１８N２O５S,CAS号:９１２１６Ｇ ９５Ｇ４),纯度≥９８％或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰７􀆰５　SＧ甲基ＧLＧ半胱氨酸(SＧMethylＧLＧcysteine,SMC,C４H９NO２S,CAS号:１１８７Ｇ８４Ｇ４),纯度≥９８％或 经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰７􀆰６　SＧ烯丙基ＧLＧ半胱氨酸(SＧAllylＧLＧcysteine,SAC,C６H１１NO２S,CAS号:２１５９３Ｇ７７Ｇ１),纯度≥９８％或 １NY/T４３５１—２０２３ 经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰７􀆰７　SＧ(反Ｇ１Ｇ丙烯基)ＧLＧ半胱氨酸(SＧtransＧ１ＧPropenylＧLＧcysteine,SPC,C６H１１NO２S,CAS号:５２４３８Ｇ ０９Ｇ２),纯度≥９８％或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰８　标准储备溶液:分别称取５mg(精确至０􀆰０１mg)水溶性有机硫化合物标准物质(５􀆰６)于５mL容量 瓶,用甲醇(５􀆰３)溶解并定容至刻度,配制成浓度为１g/L的标准储备溶液. ５􀆰９　标准工作溶液:移取适量标准储备液(５􀆰８),用０􀆰１％甲酸水溶液(５􀆰５)稀释成浓度为２０μg/L、５０ μg/L、１００μg/L、２００μg/L、５００μg/L、１０００μg/L的混合标准工作溶液,现用现配. ５􀆰１０　微孔滤膜:０􀆰２２μm水相滤膜. ６　仪器设备 ６􀆰１　液相色谱Ｇ串联质谱仪:配有电喷雾离子源. ６􀆰２　真空冷冻干燥机. ６􀆰１　试验筛:孔径０􀆰１８mm. ６􀆰１　研磨仪. ６􀆰１　分析天平:感量０􀆰０１g、０􀆰００１g、０􀆰０００１g和０􀆰０１mg. ６􀆰１　超声波仪. ６􀆰１　离心机:转速不低于１００００r/min. ７　分析步骤 ７􀆰１　试样的制备 ７􀆰１􀆰１　鲜蒜:取无损伤的大蒜可食部分,混匀缩分至约５０g(精确至０􀆰００１g),在－７０℃条件下真空冷冻 干燥.称取冻干后试样的质量(精确至０􀆰００１g)后,用研磨仪将其粉碎,过０􀆰１８mm试验筛,－２０℃下保 存待测. ７􀆰１􀆰２　蒜片:用研磨仪粉碎,过０􀆰１８mm试验筛,－２０℃下保存待测. ７􀆰１􀆰３　蒜粉:过０􀆰１８mm试验筛,－２０℃下保存待测. ７􀆰２　试样的提取 称取０􀆰１g(精确至０􀆰０００１g)试样于５０mL塑料离心管中,加入２０mL０􀆰１％甲酸水溶液(５􀆰５),涡 旋１min后,在室温下超声提取１０min,１００００r/min离心５min,取上清液经０􀆰２２μm微孔滤膜(５􀆰１０) 过滤至样品瓶中,进行液相色谱Ｇ串联质谱仪(６􀆰１)测定.根据试样中水溶性有机硫化合物含量和液相色 谱Ｇ串联质谱仪(６􀆰１)灵敏度,必要时可使用０􀆰１％甲酸水溶液(５􀆰５)适当稀释后进行测定. ７􀆰３　测定 ７􀆰３􀆰１　液相色谱参考条件 a)　色谱柱:C１８色谱柱,２􀆰１mm×１５０mm,粒径３􀆰５μm,或性能相当者; b)　流动相:A相为０􀆰１％甲酸水溶液(５􀆰５),B相为０􀆰１％甲酸乙腈溶液(５􀆰６); c)　流速:０􀆰２５mL/min; d)　进样量:５μL; e)　柱温:４０℃; f)　流动相梯度洗脱程序见表１. 表１　流动相梯度洗脱程序 时间,min 流动相A,％ 流动相B,％ ０ ９８ ２ ２ ９８ ２ ２NY/T４３５１—２０２３ 表１(续) 时间,min 流动相A,％ 流动相B,％ ５ ５０ ５０ ６ ０ １００ １０ ０ １００ １０􀆰１ ９８ ２ １５ ９８ ２ ７􀆰３􀆰２　质谱参考条件 a)　电离源:电喷雾离子源; b)　电离源极性:正离子模式; c)　质谱扫描方式:多离子反应监测(MRM); d)　电喷雾电压:３􀆰６kV; e)　雾化温度:３２０℃; f)　离子传输管温度:３２５℃; g)　水溶性有机硫化合物的质谱分析参考参数见表２. 表２　水溶性有机硫化合物的质谱分析参考参数 化合物 保留时间,min定量离子对,m/z定性离子对,m/z聚焦透镜电压,V碰撞能量,eV 甲基蒜氨酸 １􀆰３９ １５２􀆰０→８８􀆰０ １５２􀆰０→４２􀆰５ ５８ １０/１７ SMC １􀆰５２ １３６􀆰０→１１９􀆰０ １３６􀆰０→７３􀆰３ ４８ １０/１３ 蒜氨酸 １􀆰６０ １７８􀆰１→８８􀆰１ １７８􀆰１→７４􀆰３ ６５ １０/２０ GSMC ２􀆰０３ ２６５􀆰１→１１９􀆰０ ２６５􀆰１→７７􀆰１ ６０ ２３/６５ SAC ２􀆰２８ １６２􀆰１→１４５􀆰０ １６２􀆰１→７３􀆰０ ６０ １０/１０ SPC ２􀆰９２ １６２􀆰１→１４５􀆰１ １６２􀆰１→１１５􀆰９ ６０ １０/１６ GSAC ７􀆰４１ ２９１􀆰１→１４５􀆰０ ２９１􀆰１→７３􀆰０ ６０ ２１/３５ ７􀆰３􀆰３　定性测定 通过试样中各组分的保留时间和特征离子与相应标准物质的保留时间和特征离子对照进行定性.在 相同测试条件下,目标化合物在试样中的保留时间与标准物质的保留时间偏差不超过±２􀆰５％,且相对离 子丰度与标准物质的离子丰度偏差不超过表３的规定范围,可判定试样中存在目标化合物. 表３　定性测定中相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度,％ ＞５０ ＞２０~５０ ＞１０~２０ ≤１０ 允许相对偏差,％ ±２０