2 0 2 3 1 2 2 2 发 布 － － 2 0 2 4 0 5 0 1 － － 实 施 薏 苡 仁 中 多 种 酯 类 物 质 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 2 2 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 0 6 0 C C S B 4 4 3 1 — 2 0 2 3 D e t e r m i n a t i o n o f e s t e r s i n j o b ’ s t e a r s h i g h - p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４４３１—２０２３ 前　　言 本文件按GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:农业农村部稻米及制品质量监督检验测试中心、中国水稻研究所. 本文件主要起草人:孙成效、于永红、方长云、胡贤巧、章林平、朱智伟. ⅠNY/T４４３１—２０２３ 薏苡仁中多种酯类物质的测定　高效液相色谱法 １　范围 本文件确立了薏苡仁中甘油三亚油酸酯、１,２Ｇ亚油酰Ｇ３Ｇ油酰反式甘油、１,２Ｇ亚油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸Ｇ甘油酯、 １,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯、１Ｇ棕榈酸Ｇ２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯和１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸甘油酯 等多种酯类物质含量的高效液相色谱测定方法. 本文件适用于薏苡仁中多种酯类物质含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB５００９􀆰３　食品中水分的测定 GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件中没有需要界定的术语和定义. ４　原理 薏苡仁试样中的酯类物质用异丙醇Ｇ乙腈混合溶液振荡提取,采用高效液相色谱Ｇ蒸发光散射检测器 测定,保留时间定性,外标法定量. ５　试剂和材料 除另有规定外,所用试剂均为分析纯,水为符合GB/T６６８２中规定的一级水. ５􀆰１　异丙醇(C３H８O,CASNo􀆰:６７Ｇ６３Ｇ０):色谱纯. ５􀆰２　乙腈(C２H３N,CASNo,:７５Ｇ０５Ｇ８):色谱纯. ５􀆰３　混合提取液:量取４００mL异丙醇(５􀆰１)和６００mL乙腈(５􀆰２)混匀,用有机相滤膜过滤. ５􀆰４　标准品(纯度均≥９５％) ５􀆰４􀆰１　甘油三亚油酸酯(C５７H９８O６,CASNo􀆰:５３７Ｇ４０Ｇ６). ５􀆰４􀆰２　１,２Ｇ亚油酰Ｇ３Ｇ油酰反式甘油(C５７H１００O６,CASNo􀆰:２１９０Ｇ２１Ｇ８). ５􀆰４􀆰３　１,２Ｇ亚油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸Ｇ甘油酯(C５５H９８O６,CASNo􀆰:２１９０Ｇ１５Ｇ０). ５􀆰４􀆰４　１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯(C５７H１０２O６,CASNo􀆰:２１９０Ｇ２０Ｇ７). ５􀆰４􀆰５　１Ｇ棕榈酸Ｇ２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯(C５５H１００O６,CASNo􀆰:１５８７Ｇ９３Ｇ５). ５􀆰４􀆰６　甘油三油酸酯(C１７H３３COOCH２)２CHOCOC１７H３３,CASNo􀆰:１２２Ｇ３２Ｇ７). ５􀆰４􀆰７　１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸甘油酯(C５５H１０２O６,CASNo􀆰:２１９０Ｇ３０Ｇ９). ５􀆰５　标准溶液配制 ５􀆰５􀆰１　标准储备液:准确称取５０􀆰００mg(精确到０􀆰０１mg)的各酯类物质标准品,分别用混合提取液５􀆰３) 定容至１０mL,配成浓度为５􀆰００mg/mL的标准储备溶液.分别移取２􀆰００mL、３􀆰００mL、２􀆰００mL、６􀆰００mL、 １􀆰５０mL、２􀆰４０mL、２􀆰００mL的甘油三亚油酸酯、１,２Ｇ亚油酰Ｇ３Ｇ油酰反式甘油、１,２Ｇ亚油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸Ｇ甘油 酯、１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯、１Ｇ棕榈酸Ｇ２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯、甘油三油酸酯和１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸甘油 酯单一标准溶液于２０mL容量瓶内,用混合提取液(５􀆰３)定容至２０mL.于４℃下,储存于密闭的棕色玻 １NY/T４４３１—２０２３ 璃瓶中,保存有效期为３个月. ５􀆰５􀆰２　混合标准工作液:分别准确移取１􀆰００mL、２􀆰５０mL、５􀆰００mL、７􀆰５０mL和１０􀆰００mL的标准储备 液(５􀆰５􀆰１)于４个１０mL的容量瓶中,用混合提取液(５􀆰３)定容至刻度,得到混合标准工作溶液,现用 现配. ５􀆰６　微孔滤膜:０􀆰４５μm,有机相. ６　仪器和设备 ６􀆰１　高效液相色谱仪:带有蒸发光散射检测器(ELSD). ６􀆰２　分析天平:感量为０􀆰００１g和０􀆰０００１g. ６􀆰３　谷物粉碎机. ６􀆰４　摇床. ７　试样制备 取薏苡仁样品５００g,去除杂质,磨成粉末,过２５０μm孔径筛,混合均匀,装入洁净的盛样袋内,备用. 待测试样同时按照GB５００９􀆰３规定的方法测定水分含量. ８　分析步骤 ８􀆰１　提取 称取２g(准确至０􀆰００１g)薏苡仁粉试样于５０mL具塞三角瓶中,准确加入２５􀆰０mL混合提取液 (５􀆰３),置于振荡摇床以１５０r/min振荡提取３０min. ８􀆰２　净化 提取液用中性滤纸过滤,滤液过０􀆰４５μm的有机相滤膜,待测. ８􀆰３　测定 ８􀆰３􀆰１　液相色谱参考条件 a)　色谱柱:反向C１８色谱柱(２５０mm×４􀆰６mm,５􀆰０μm),或者性能相当者; b)流动相:混合提取液(５􀆰３),采用等度洗脱; c)流动相流速:１􀆰０mL/min; d)柱温:３０℃; e)进样量:２０μL. ８􀆰３􀆰２　标准曲线 取混合标准工作液(５􀆰５􀆰２),在８􀆰３􀆰１的条件下,按照浓度由低到高依次进样测定,以各酯类物质的面 积和浓度按照公式(１)计算并作图,得到标准曲线中七种酯类物质色谱图,见附录A. Y＝b×X２(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: Y　———峰面积, a,b———a,b为与蒸发室温度、流动相性质等检测条件有关的常数; X———标准溶液中各种酯类物质含量的数值,单位为毫克每毫升(mg/mL); 按照仪器数据处理软件的处理方式不同,也可以作对数方程,即lgY＝lgb＋a􀅰lgX ８􀆰３􀆰３　定量测定 取试样溶液进样测定,从标准曲线得到样液中各种酯类物质浓度.试样溶液中各酯类物质的响应值 应均在标准曲线线性范围内;如果超出线性范围,应用混合溶液(５􀆰３)进行适当稀释后进样测定.样品溶 液分别注入液相色谱仪中按照８􀆰３􀆰１所列色谱参考条件进行测定. ９　结果计算 试样中单一酯类物质的含量以质量分数ω计,数值以毫克每克(mg/g)表示,按公式(２)计算. ２NY/T４４３１—２０２３ ωi＝ci×V m×１００ １００－s×f (２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ωi———试液中单一酯类物质质量浓度的数值,单位为毫克每克(mg/g); ci———根据标准曲线计算出的提取液中酯类物质含量的数值,单位为毫克每毫升(mg/mL); V———提取液定容体积的数值,单位为毫升(mL); m———试样质量的数值,单位为克(g); s———试样水分含量的数值,单位为百分号(％); f———稀释倍数. 计算结果保留３位有效数字. １０　精密度 １０􀆰１　在重复性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的　　 　　　　１０％. １０􀆰２　在再现性条件下,获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的２０％. １１　检出限和定量限 薏苡仁样品以称样量２g计算,７种酯类物质的方法检出限和定量限就符合附录B的要求. ３NY/T４４３１—２０２３ 附　录　A (资料性) 标准溶液中７种酯类物质色谱图 　 标准溶液中７种酯类物质的色谱图,见图A􀆰１. 标引序号说明: １———甘油三亚油酸酯,浓度０􀆰５００mg/mL; ２———１,２Ｇ亚油酰Ｇ３Ｇ油酰反式甘油,浓度０􀆰７５０mg/mL; ３———１,２Ｇ亚油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸Ｇ甘油酯,浓度０􀆰５００mg/mL; ４———１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯,浓度１􀆰５０mg/mL; ５———１Ｇ棕榈酸Ｇ２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ亚油酸甘油酯,浓度０􀆰３７５mg/mL; ６———甘油三油酸酯,浓度０􀆰６００mg/mL; ７———１,２Ｇ油酸Ｇ３Ｇ棕榈酸甘油酯,浓度０􀆰５００mg/mL. 图A􀆰１　标准溶液中７种酯类物质的色谱图 ４