2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 水 稻 耐 冷 性 鉴 定 技 术 规 程 0 5 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 4 5 4 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r i d e n t i f i c a t i o n o f c o l d t o l e r a n c e i n r i c e Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４４５４—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及到专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:中国农业科学院作物科学研究所、吉林省农业科学院(中国农业科技东北创新中 心)、云南省农业科学院生物技术与种质资源研究所. 本文件主要起草人:韩龙植、马小定、崔迪、张三元、戴陆园、杨春刚、汤翠凤、韩冰. ⅠNY/T４４５４—２０２５ 水稻耐冷性鉴定技术规程 １　范围 本文件确立了水稻耐冷性鉴定程序,规定了发芽期、芽期、幼苗期、孕穗期和开花期耐冷性鉴定过程中 样品准备、种子浸种、种子催芽、育苗移栽、低温处理、鉴定指标调查、耐冷性分级与判定等阶段的有关要 求,描述了上述阶段的操作过程记录、标记等追溯方法. 本文件适用于亚洲栽培稻(OryzasativaL􀆰)的耐冷性鉴定. ２　规范性引用文件 本文件没有规范性引用文件. ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 相对发芽率　relativegerminationpercentage 同一品种低温处理下种子发芽率与对照处理下种子发芽率的百分比. ３􀆰２ 死苗率　deadseedlingpercentage 死苗数占供试出芽种子粒数的百分比. ３􀆰３ 叶赤枯度　leafredblightdegree 鉴定种质幼苗期受低温冷害后,叶片呈黄化、干枯或幼苗死亡的等级描述. ３􀆰４ 空壳率　emptygrainpercentage 稻穗的空瘪粒数占总粒数的百分比. ３􀆰５ 耐冷级别　coldtolerancegrade 鉴定种质耐冷程度的等级描述. ４　发芽期耐冷性鉴定 ４􀆰１　样品准备 ４􀆰１􀆰１　对照品种 采用以下对照品种或已知耐冷水稻种质作为耐冷对照. 耐冷对照品种:松粳１６、延粳２８、铁粳６号、昆明小白谷. ４􀆰１􀆰２　种子准备 每份鉴定种质和对照品种精选成熟饱满的种子５００粒,不包衣或拌种. ４􀆰２　仪器与试剂 ４􀆰２􀆰１　仪器及器具 恒温烘箱、光照培养箱、直径９cm培养皿、９cm定性滤纸、镊子. ４􀆰２􀆰２　试剂 ２􀆰５％NaClO(v/v)消毒液、蒸馏水. １NY/T４４５４—２０２５ ４􀆰３　鉴定步骤 ４􀆰３􀆰１　种子浸种 将鉴定种质和对照品种的种子置于５０℃恒温烘箱处理４８h.每份材料随机挑选饱满无霉点种子５０ 粒,置于垫双层滤纸的１个培养皿中,培养皿上标注鉴定种质编号,设３次重复.用２􀆰５％NaClO(v/v)消 毒液处理３０min,用蒸馏水清洗３次~４次.加入适量蒸馏水,浸没种子;在常温下浸种２４h后,再用蒸 馏水洗涤２次~３次. ４􀆰３􀆰２　低温处理 在浸种后的培养皿里加入１５mL蒸馏水,盖好皿盖,置于昼１０h/夜１４h、昼光照１０００lx的１４℃光 照培养箱内,进行低温处理.每天更换等体积蒸馏水１次. ４􀆰３􀆰３　对照处理 在浸种后的培养皿里加入１５mL蒸馏水,盖好皿盖,置于昼１０h/夜１４h、昼光照１０００lx的３０℃光 照培养箱内催芽.每天更换等体积蒸馏水１次. ４􀆰３􀆰４　发芽粒数调查 低温处理和对照处理１４d后,调查种子发芽粒数.以芽长达种子长度的一半,根长达种子长度为发 芽标准,调查记载发芽种子粒数. ４􀆰３􀆰５　发芽率计算 种子发芽率按公式(１)计算: G＝NGN NTN×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: G———发芽率的数值,单位为百分号(％); NGN———种子发芽粒数的数值; NTN———供试的种子总粒数的数值. ４􀆰３􀆰６　相对发芽率计算 根据低温处理和对照处理下检测的发芽率,按公式(２)计算相对发芽率: RG＝GLT GCK×１００ (２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: RG———相对发芽率的数值,单位为百分号(％); GLT———低温处理下发芽率的数值,单位为百分号(％); GCK———对照处理下发芽率的数值,单位为百分号(％). ５　芽期耐冷性鉴定 ５􀆰１　样品准备 ５􀆰１􀆰１　对照品种 耐冷对照品种:松粳１６、延粳２８、铁粳６号、昆明小白谷. ５􀆰１􀆰２　种子准备 同４􀆰１􀆰２. ５􀆰２　仪器与试剂 同４􀆰２. ５􀆰３　鉴定步骤 ５􀆰３􀆰１　种子催芽 将鉴定种质和对照品种的种子置于５０℃恒温烘箱处理４８h.每份材料随机挑选饱满无霉点种子 １００粒,置于垫双层滤纸的１个培养皿中,培养皿上标注鉴定种质编号,设３次重复.用２􀆰５％NaClO(v/ ２NY/T４４５４—２０２５ v)消毒液处理３０min,蒸馏水清洗３次~４次.加入适量蒸馏水,浸没种子;在常温下浸种２４h后,再用 蒸馏水洗涤２次~３次.盖好皿盖,在设置为无光照条件的３０℃~３２℃培养箱内催芽１d~３d,当芽长达 到约５mm时从培养箱取出. ５􀆰３􀆰２　挑选发芽种子 从培养箱取出培养皿,用蒸馏水洗涤１次~２次.从发芽的种子中挑选芽长约５mm的种子５０粒, 置于原培养皿,加入适量水,使水深达到种子厚度的一半,盖好皿盖. ５􀆰３􀆰３　低温处理 将放好发芽种子的培养皿置于昼１４h/夜１０h、昼光照３０００lx的５℃光照培养箱内,低温处理１０d. ５􀆰４　死苗数调查 低温处理结束后,从光照培养箱中取出培养皿.用蒸馏水洗涤２次~３次后,置于温度２５℃左右有 阳光的室内或温室,使其恢复生长.每天更换１次水.恢复生长７d~１０d后,调查死苗数. ５􀆰５　死苗率计算 按公式(３)计算死苗率: DR＝NDS NTN×１００ (３) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: DR———死苗率的数值,单位为百分号(％); NDS———死苗数的数值; NTN———供试的发芽种子总粒数的数值. ６　幼苗期耐冷性鉴定 ６􀆰１　样品准备 ６􀆰１􀆰１　对照品种 松粳１６、吉粳８１、中花８号、昆明小白谷. ６􀆰１􀆰２　种子准备 同４􀆰１􀆰２. ６􀆰２　仪器设施及试剂 ６􀆰２􀆰１　仪器设施 人工气候箱、光照培养箱、恒温冷水池、温室、塑料大棚. ６􀆰２􀆰２　试验器具及试剂 育苗盘(６０cm×３０cm×３cm)、营养土、２􀆰５％NaClO(v/v)消毒液. ６􀆰３　鉴定步骤 ６􀆰３􀆰１　播种育秧 种子经消毒、浸种和催芽,将发芽种子播种于装有床土的育苗盘中;育苗盘上标注鉴定种质编号.每 个材料播１５粒~２０粒,以行距５cm、株距２cm进行点播.设３次重复.在能够使秧苗正常生长的温室、 塑料大棚育苗. ６􀆰３􀆰２　低温处理 在３叶~４叶龄期,将试验秧苗置于昼１４h/夜１０h、昼光照３０００lx的１０℃人工气候箱,低温处理７ d;或置于１２℃恒温冷水池(水深５cm),低温处理１０d. ６􀆰４　叶赤枯度调查 低温处理结束后,将鉴定种质秧苗移至２５℃左右的温室,使其恢复生长.７d~１０d后,调查记载幼 苗的叶赤枯度. ７　孕穗期耐冷性鉴定 ７􀆰１　样品准备 ３NY/T４４５４—２０２５ ７􀆰１􀆰１　耐冷对照品种 松粳１６、龙粳３１、吉粳８１、铁粳６号、丽粳９号、昆明小白谷. ７􀆰１􀆰２　种子准备 同４􀆰１􀆰２. ７􀆰２　仪器设施及试剂 ７􀆰２􀆰１　仪器设施 人工气候箱、人工气候室、恒温冷水池、恒温冷水灌溉鉴定圃. ７􀆰２􀆰２　器具及试剂 育苗盘(６０cm×３０cm×３cm)、营养土、２􀆰５％NaClO(v/v)消毒液、塑料桶、钵、标牌、标签、剪子. ７􀆰３　短期低温处理鉴定 ７􀆰３􀆰１　育苗移栽 种子经消毒、浸种和催芽,将发芽种子播在装有床土的育苗盘进行育秧;育苗盘上标注鉴定种质编 号.在３叶~４叶龄期,把秧苗移栽到装有营养土的塑料桶或钵里,每个桶或钵里栽６穴,每穴１株,并 插标牌标注种质编号.每份鉴定种质栽５桶或钵.在水稻生长过程中,每个单株保留１个主茎或分蘖 茎,其余剪掉. ７􀆰３􀆰２　低温处理 在减数分裂期即当剑叶与倒二叶的叶枕距为－４cm~２cm时进行低温处理.处理前挑选水稻茎的 叶枕距处于－４cm~２cm的３个桶或钵挂标签标记,标注低温处理起始日期.上午８:００将鉴定植株置 于昼１４h/夜１０h、昼光照３０００lx的１６℃人工气候箱低温处理７d;或置于１６℃恒温冷水池(水深 ３０cm),低温处理７d. ７􀆰３􀆰３　空瘪粒数调查 低温处理结束后,将鉴定植株移至能够使水稻正常生长的温室或室外,成熟后调查挂标签的稻穗空瘪 粒数.以穗部露出剑叶鞘外３cm时作为抽穗标准,记载挂标签植株的抽穗期,并计算低温处理起始至抽 穗的历时时间.历时９d~１３d的稻穗空瘪粒数均视为有效数据;历时小于９d或大于１３d的稻穗空瘪 粒数均视为无效数据.随机挑选低温处理视为有效的１０个稻穗,调查每穗空瘪粒数和每穗总粒数,计算 其平均值. ７􀆰３􀆰４