2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 水 稻 细 菌 性 穗 枯 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 1 5 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 4 5 7 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r r e s i s t a n c e i d e n t i f i c a t i o n o f r i c e t o b a c t e r i a l p a n i c l e b l i g h t Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４４５７—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:中国水稻研究所、全国农业技术推广服务中心. 本文件主要起草人:侯雨萱、黄世文、卓富彦、梁燕、季芝娟、曾宇翔. ⅠNY/T４４５７—２０２５ 水稻细菌性穗枯病抗性鉴定技术规程 １　范围 本文件确立了水稻细菌性穗枯病抗性鉴定程序,规定了鉴定程序、接种体准备、鉴定材料种植、接种、 病情调查、抗病性评价、鉴定后材料处理、记录. 本文件适用于水稻资源、品种和品系等材料对水稻细菌性穗枯病的抗性鉴定和评价. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB４４０４􀆰１　粮食作物种子　禾谷类 NY/T４９６　肥料合理使用准则　通则 NY/T１２７６　农药安全使用规范总则 NY/T４２４８　水稻生产全程质量控制技术规范 ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 水稻细菌性穗枯病　ricebacterialpanicleblight 是由颖壳伯克氏菌(Burkholderiaglumae)引起的一种水稻细菌性病害,主要危害幼苗和谷穗,导致 烂秧、谷粒变色和稻穗枯死. ４　鉴定程序 鉴定程序包含６个阶段,程序流程图如图１所示. 图１　水稻细菌性穗枯病抗性鉴定流程 ５　接种体准备 ５􀆰１　接种体选择 根据试验需要选取当地的优势菌株作为接种体,菌株见附录A. ５􀆰２　接种体繁殖、制备 取－８０℃冻存的颖壳伯克氏菌株,以１∶１０００的比例转接NA液体培养基,培养基中含有５０μg/mL的 １NY/T４４５７—２０２５ 氨苄青霉素,在３７℃、２００r/min的条件下培养１６h~２４h,采用灭菌的蒸馏水稀释菌液,使其在６００nm 处的吸光值(OD６００)为０􀆰２~０􀆰３(含０􀆰０１％的吐温Ｇ２０),作为接种体备用. ６　鉴定材料种植 ６􀆰１　鉴定圃选择 应设置在土地平整、土质肥沃、排灌方便的细菌性穗枯病常发田. ６􀆰２　种子质量 应符合GB４４０４􀆰１常规稻或杂交稻一级种的要求,不应带检疫性病虫. ６􀆰３　种植要求 鉴定材料播种时间与大田生产播种时间相同或适当调整,以使植株接种期和发病期能够与适宜水稻 细菌性穗枯病发生流行的气候条件(日均气温大于２５℃,相对湿度大于７０％)相遇,保证鉴定结果的准确 性.鉴定材料的育苗和移栽按NY/T４２４８的规定执行. ６􀆰４　种植设计 每份鉴定材料种植４行,每行６丛,行间距为２０cm,丛距为１６cm,３次重复.鉴定材料按顺序或随 机排列,每５０份鉴定材料设附录B中已知抗病和感病对照材料,或设当地种植的抗病品种和感病品种作 为对照. ６􀆰５　保护行设置 在鉴定材料四周种植不少于２行的保护行品种,丛行距与鉴定材料相同.保护行品种应选择相对抗 病的品种. ６􀆰６　田间管理 耕作方式和田间管理按照当地常规的大田生产习惯进行.肥料施用应符合NY/T４９６的要求.农药 使用应符合NY/T１２７６的要求.鉴定材料在全生育期内不使用杀菌剂. ７　接种 ７􀆰１　接种时期 当水稻３０％~４０％的穗抽出时,于１６:００~１８:００时进行接种. ７􀆰２　接种方法 接种采用喷雾法.将OD６００值为０􀆰２~０􀆰３的菌液(含０􀆰０１％的吐温Ｇ２０)装入容积为１０００mL的塑 料喷壶,对整个稻穗均匀喷雾,直至叶片有微小菌液滴形成,隔１d喷雾１次,共喷３次.每份鉴定材料重 复３次,每个重复接种不少于２０株. ７􀆰３　接种前后的田间管理 接种前后应及时进行田间灌溉,使田间保持２cm~３cm的水层. ８　病情调查 ８􀆰１　调查时间 接种后２１d. ８􀆰２　调查与记载 观测鉴定材料的发病情况,每份鉴定材料随机调查１０丛,计算每丛发病最严重稻穗的病粒(变色谷 粒)比率.调查结果的记载采用附录C中的表C􀆰１. ９　抗病性评价 ９􀆰１　病情级别划分 依据鉴定材料稻穗上谷粒的病粒比率,进行病情分级,病情级别及其对应的症状描述见表１. ２NY/T４４５７—２０２５ 表１　水稻细菌性穗枯病病情级别划分 病情级别 病情 ０ 稻穗没有病粒 １ 稻穗上有少量病粒,每穗病粒数占总谷粒数的０􀆰１％~２０􀆰０％ ３ 稻穗上有小部分病粒,每穗病粒数占总谷粒数的２０􀆰１％~４０􀆰０％ ５ 稻穗上有一半左右病粒,每穗病粒数占总谷粒数的４０􀆰１％~６０􀆰０％ ７ 稻穗上有大部分病粒,每穗病粒数占总谷粒数的６０􀆰１％~８０􀆰０％ ９ 稻穗上基本全部为病粒,每穗病粒数占总谷粒数的＞８０􀆰１％ ９􀆰２　病情指数计算 根据病情症状描述,调查每穗的病粒比率,记载病情级别,计算鉴定材料的病情指数(DI).病情指数 按公式(１)计算. DI＝∑(Bi×Bd) M×Md×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 DI———病情指数的数值; Bi———各病情级别的稻穗数的数值; Bd———各病情级别的代表数值的数值; M———调查总稻穗数的数值; Md———最高病情级别的代表数值(此处为９). ９􀆰３　抗病性评价指标 根据表２的抗病性评价指标,依据鉴定材料３次重复的病情指数(DI)平均值确定其对水稻细菌性穗 枯病的抗性水平. 表２　水稻细菌性穗枯病抗性评价指标 病情指数(DI) 抗性评价 ０􀆰０≤DI≤１０􀆰０ 高抗(HR) １０􀆰０＜DI≤２０􀆰０ 抗病(R) ２０􀆰０＜DI≤４０􀆰０ 中抗(MR) ４０􀆰０＜DI≤６０􀆰０ 中感(MS) ６０􀆰０＜DI≤７５􀆰０ 感病(S) ７５􀆰０＜DI≤１００􀆰０ 高感(HS) ９􀆰４　抗病鉴定有效性判别 当鉴定圃中感病对照品种病情指数(DI)大于６０,该次水稻细菌性穗枯病抗性鉴定视为有效. ９􀆰５　重复鉴定 初次鉴定中表现为抗、中抗、中感的材料,翌年用相同的病原菌进行重复鉴定.当年度间或批次间鉴 定结果不一致时,通常以最高病情指数为准.经２年~３年重复鉴定,最高病情指数(DI)为２０以下的材 料才能定为抗病材料. ９􀆰６　抗性评价结果 抗性评价结果记载采用表C􀆰２,并对试验结果加以分析,原始资料应保存完整备考察验证. １０　鉴定后材料的处理 １０􀆰１　接种体处理 剩余接种体带回实验室灭菌处理. １０􀆰２　田间病株处理 鉴定后的田间病株应烧毁或带出稻田外深埋等无害化处理. ３NY/T４４５７—２０２５ １１　记录 应建立水稻细菌性穗枯病抗性鉴定全过程记录.包括病原菌的来源,接种体的制备,鉴定材料的种 植、肥水农药管理,接种的浓度、时期、方法,病情调查的时间、方法,抗性评价的方法和结果,鉴定后材料的 处理等信息.形成档案,定期归档.档案保存时间不少于２年,做到可追溯. ４NY/T４４５７—２０２５ 附　录　A (资料性) 颖壳伯克氏菌的生物学特性、水稻危害症状及分离鉴定和保存方法 　 A􀆰１　分类地位 颖壳伯克氏菌(Burkholderiaglumae)属原核生物界(Procaryotae)细菌门(Bacteria)βＧ杆菌纲(BetapＧ roteobacteria)伯克氏菌目(Burkholderiales)伯克氏菌科(Burkholderiaceae)伯克氏菌属(Burkholderia). A􀆰２　生物学特性 A􀆰２􀆰１　形态特征 革兰氏阴性杆菌,好氧,有荚膜,无芽孢,在NA、LB、PDA培养基上菌落呈灰白色、圆形隆起且光滑, 在KB培养基上产生黄色素,长１􀆰５μm~２􀆰５μm,宽０􀆰５μm~０􀆰７μm,有１根~７根极生鞭毛. A􀆰２􀆰２　生理生化特性 过氧化氢酶和卵磷脂酶呈阳性反应,氧化酶、酪氨酸酶、精氨酸双水解酶、苯丙氨酸脱氨酶呈阴性反 应.能利用阿拉伯糖、果糖、半乳糖、葡萄糖、甘油、甘露醇、甘露糖、山梨醇、木糖、乳糖和棉籽糖产酸.能 水解吐温Ｇ８０、淀粉,还原石蕊和硝酸,不能水解熊果苷和七叶苷,不产生吲哚及硫化氢.抗生素敏感性:对 氨苄青霉素产生抗性,对卡那霉素、链霉素、氯霉素和利福平敏感. 生长温度:在２５℃~４０℃都可生长,最适生长温度为３０℃~４０℃. 生长pH:最适pH为６􀆰０~７􀆰５. A􀆰３　水稻细菌性穗枯病田间典型症状 由颖壳伯克氏菌引起的水稻细菌性穗枯病以种子带菌为主传染.种子带菌重时,播后不发芽或发芽 后染病,水渍状黑褐色,很快死亡;种子带菌轻时,能发芽,秧苗正常生长,只是生长细弱,移栽后一直生长 正常,直到孕穗Ｇ抽