2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 谷 物 籽 粒 中 直 链 淀 粉 的 测 定 分 光 光 度 法 2 0 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 7 . 0 4 0 C C S B 4 4 7 9 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f a m y l o s e i n g r a i n s — S p e c t r o p h o t o m e t r i c m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４４７９—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:中国农业科学院作物科学研究所、黑龙江省农业科学院农产品质量安全研究所、中 国水稻研究所. 本文件主要起草人:孙丽娟、李静梅、戴常军、付金东、杜文明、张妍、方长云、吴丽、李为喜、刘丽. ⅠNY/T４４７９—２０２５ 　 　 　谷物籽粒中直链淀粉的测定　分光光度法 １　范围 本文件描述了分光光度法测定水稻、玉米、谷子、小麦、高粱等谷物籽粒中直链淀粉含量的方法. 本文件适用于水稻、玉米、谷子、小麦、高粱等谷物籽粒直链淀粉含量的测定,其初级加工品可参照 执行. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 在淀粉总量不变的条件下,将直链淀粉与支链淀粉分散液按不同比例混合后,加入碘试剂生成碘淀 粉显色复合物,在波长６２０nm处测定复合物的吸光度,其吸光度和直链淀粉浓度呈线性关系. ５　试剂与材料 ５􀆰１　除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯.水为符合GB/T６６８２规定的三级水. ５􀆰２　试剂 ５􀆰２􀆰１　氢氧化钠(NaOH,CAS号为１３１０Ｇ７３Ｇ２). ５􀆰２􀆰２　冰乙酸(C２H４O２,CAS号为６４Ｇ１９Ｇ７),纯度≥９５％. ５􀆰２􀆰３　碘(I２,CAS号为７５５３Ｇ５６Ｇ２). ５􀆰２􀆰４　碘化钾(KI,CAS号为７６８１Ｇ１１Ｇ０). ５􀆰２􀆰５　乙醇(C２H５OH,CAS号为６４Ｇ１７Ｇ５),纯度≥９５％. ５􀆰２􀆰６　石油醚(CnH２n＋２,CAS号为８０３２Ｇ３２Ｇ４),沸程为６０℃~９０℃. ５􀆰３　试剂配制 ５􀆰３􀆰１　氢氧化钠溶液[c(NaOH)＝１mol/L]:称取４０􀆰０g氢氧化钠,用水溶解并稀释定容至１０００mL. ５􀆰３􀆰２　氢氧化钠溶液[c(NaOH)＝０􀆰０９mol/L]:吸取９􀆰０mL氢氧化钠溶液(５􀆰３􀆰１),用水定容至 １００mL,现用现配. ５􀆰３􀆰３　冰乙酸水溶液[c(C２H４O２)＝１mol/L]:量取５７􀆰７mL冰乙酸,用水稀释并定容至１０００mL. ５􀆰３􀆰４　碘储备溶液:称取２􀆰０００g碘和２０􀆰０００g碘化钾,用水溶解并稀释定容至１００mL,避光保存. ５􀆰３􀆰５　碘试剂:取１０􀆰０mL碘储备液(５􀆰３􀆰４)稀释至１００mL,现用现配. ５􀆰４　标准品 ５􀆰４􀆰１　马铃薯直链淀粉:总淀粉含量≥９５％,直链淀粉占总淀粉含量≥９９％,最大吸收峰(λmax)为 ６３５nm~６４５nm;或经国家认证并授予标准物质证书的标准物质. ５􀆰４􀆰２　水稻支链淀粉:支链淀粉占总淀粉含量≥９９％,λmax为５１５nm~５２５nm;或经国家认证并授予标 １NY/T４４７９—２０２５ 准物质证书的标准物质. ５􀆰４􀆰３　玉米支链淀粉:支链淀粉占总淀粉含量≥９９％,λmax为５３０nm~５４０nm;或经国家认证并授予标 准物质证书的标准物质. ５􀆰４􀆰４　谷子支链淀粉:支链淀粉占总淀粉含量≥９９％,λmax为５３０nm~５４０nm;或经国家认证并授予标 准物质证书的标准物质. ５􀆰４􀆰５　小麦支链淀粉:支链淀粉占总淀粉含量≥９９％,λmax为５４０nm~５５０nm;或经国家认证并授予标 准物质证书的标准物质. ５􀆰４􀆰６　高粱支链淀粉:支链淀粉占总淀粉含量≥９９％,λmax为５３０nm~５４０nm;或经国家认证并授予标 准物质证书的标准物质. ５􀆰４􀆰７　其他谷物支链淀粉可参照同种属标准品. ５􀆰５　标准溶液配制 ５􀆰５􀆰１　马铃薯直链淀粉标准溶液(１mg/mL):称取烘干(５５℃~５６℃真空干燥)的马铃薯直链淀粉标 准品(５􀆰４􀆰１),其质量相当于含０􀆰１０００g淀粉,放入１００mL容量瓶中,加入１mL乙醇(５􀆰２􀆰５)湿润样 品,再加９􀆰０mL１mol/L氢氧化钠溶液(５􀆰３􀆰１),于沸水浴分散１０min,迅速冷却后,用水定容至 １００mL. ５􀆰５􀆰２　支链淀粉标准溶液(１mg/mL):选择与待测谷物样品相应的支链淀粉标准品,称取相当于含 ０􀆰１０００g粗淀粉,放入１００mL容量瓶中,加１mL乙醇(５􀆰２􀆰５)湿润样品,再加９􀆰０mL１mol/L氢氧化 钠溶液(５􀆰３􀆰１),于沸水浴分散１０min,迅速冷却后,用水定容至１００mL. ６　仪器设备 ６􀆰１　粉碎机:实验室用旋风磨. ６􀆰２　可见分光光度计:可在６２０nm处测量吸光度. ６􀆰３　分析天平:感量０􀆰１g、０􀆰０００１g. ６􀆰４　恒温水浴锅. ６􀆰５　振荡器:“８”字振荡器振速需达１０００r/min,水平振荡器振速需达２５００r/min,其他振荡器需满足 上述要求. ６􀆰６　真空干燥箱:控温范围４０℃~２００℃. ６􀆰７　带盖离心管５０mL. ６􀆰８　容量瓶１００mL、１０００mL. ７　操作步骤 ７􀆰１　试样制备 ７􀆰１􀆰１　将样品清选干净,带壳样品应脱壳;精米应为适碾及以上;高水分含量样品应干燥.样品按四分法 分取约２０g. ７􀆰１􀆰２　用粉碎机将样品粉碎,需９０％以上通过０􀆰１７７mm孔径筛(８０目). ７􀆰２　标准曲线 ７􀆰２􀆰１　取６个１００mL容量瓶,分别加入１mg/mL马铃薯直链淀粉标准溶液０mL、０􀆰２５mL、０􀆰５０mL、 １􀆰００mL、１􀆰５０mL、２􀆰００mL,再依次加入１mg/mL支链淀粉标准溶液５􀆰００mL、４􀆰７５mL、４􀆰５０mL、 ４􀆰００mL、３􀆰５０mL、３􀆰００mL,标准溶液合计为５mL. ７􀆰２􀆰２　另取１个１００mL容量瓶,加入０􀆰０９mo１/L氢氧化钠溶液(５􀆰３􀆰２)５􀆰００mL作空白. ７􀆰２􀆰３　以上各瓶中依次加入约５０mL水、１􀆰０mL１mol/L冰乙酸(５􀆰３􀆰３)及１􀆰０mL碘试剂(５􀆰３􀆰５),用 水定容至１００mL.加入碘试剂后计时,显色２０min后,在６２０nm处读取吸光度,以空白(７􀆰２􀆰２)调零. 以直链淀粉质量(mg)为横坐标,吸光度为纵坐标,绘制标准曲线或建立回归方程. ２NY/T４４７９—２０２５ ７􀆰３　试样测定 ７􀆰３􀆰１　称取０􀆰１０００g~０􀆰２０００g样品(约含０􀆰１g粗淀粉)于１００mL容量瓶中,加１mL乙醇(５􀆰２􀆰５), 充分湿润样品,再加入９􀆰０mL１mol/L氢氧化钠溶液(５􀆰３􀆰１),于沸水浴中分散１０min,迅速冷却,用水 定容. ７􀆰３􀆰２　取２０mL分散液(７􀆰３􀆰１)于５０mL带盖离心管中,加入１０mL石油醚(５􀆰２􀆰６),盖上盖子,剧烈振 荡１min,静止３０min,分层后用吸管吸去上部石油醚层,对该分散液重复以上脱脂操作１次~３次(建议 精米、小麦脱脂１次,高粱脱脂２次,玉米、谷子脱脂３次),最后一次脱脂静止３０min后,石油醚层１/４以 上为澄清状. ７􀆰３􀆰３　吸取脱脂后的分散液(７􀆰３􀆰２)５􀆰００mL于１００mL容量瓶中,加水５０mL,再加入１mol/L冰乙酸 溶液(５􀆰３􀆰３)１􀆰０mL及碘试剂(５􀆰３􀆰５)１􀆰０mL,用水定容.加入碘试剂后计时,显色２０min后,在 ６２０nm处读取吸光度,以空白调零,将待测样品吸光度代入回归方程计算直链淀粉含量. 注:测定样品与测定校准曲线时的环境温度相差不能超过±１℃. ８　结果计算 试样中直链淀粉的含量(占干基样品)按公式(１)计算. X＝G×２０ m１×１０×１００－H ( )×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: X———样品中直链淀粉含量(干基)的数值,单位为百分号(％); G———从标准曲线或回归方程中换算出的直链淀粉质量的数值,单位为毫克(mg); m１———称取样品质量的数值,单位为克(g); ２０———样品溶液稀释倍数的数值; H———样品水分含量的数值,单位为百分号(％); １０———换算因子的数值. 试样中直链淀粉的含量(占干基淀粉)按公式(２)计算. Y＝G×２０×１０ m２×C×１００－H ( )×１００ (２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: Y———样品中直链淀粉含量(干基)的数值,单位为百分号(％); G———从标准曲线或回归方程中换算出的直链淀粉质量的数值,单位为毫克(mg); m２———称取样品质量的数值,单位为克(g); C———样品淀粉干基含量的数值,单位为百分号(％); ２０———样品溶液稀释倍数的数值; H———样品