2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 食 用 菌 中 蘑 菇 醇 的 测 定 气 相 色 谱 - 串 联 质 谱 法 0 4 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 0 1 C C S B 4 5 0 7 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f m u s h r o o m a l c o h o l i n m u s h r o o m — G a s c h r o m a t o g r a p h y - t a n d e m m a s s s p e c t r o m e t r y m e t h o d Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４５０７—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本标准的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:上海市农业科学院农产品质量标准与检测技术研究所、农业农村部食用菌产品质量 监督检验测试中心(上海)、江苏安惠生物科技有限公司、上海科立特农产品检测技术服务有限公司. 本文件主要起草人:周昌艳、李晓贝、赵晓燕、李健英、张艳梅、董慧、赵志勇、鄂恒超、陈惠、范婷婷、李 旭娇、何香伟、彭书婷、陈骏骅、邵拥军. ⅠNY/T４５０７—２０２５ 　 　 　食用菌中蘑菇醇的测定　气相色谱串联质谱法 １　范围 本文件规定了食用菌中蘑菇醇含量的气相色谱串联质谱测定方法. 本文件适用于食用菌中蘑菇醇含量的测定. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样经乙腈振荡提取,分散固相萃取净化,气相色谱串联质谱仪测定,通过保留时间定性,外标法 定量. ５　试剂和材料 除非另有说明,本方法所用试剂均为分析纯试剂,实验室用水符合GB/T６６８２中一级水的规定. ５􀆰１　试剂 ５􀆰１􀆰１　乙腈(CH３CN,CAS号:７５Ｇ０５Ｇ８):色谱纯. ５􀆰１􀆰２　甲醇(CH３OH,CAS号:６７Ｇ５６Ｇ１):色谱纯. ５􀆰１􀆰３　氯化钠(NaCl,CAS号:７６４７Ｇ１４Ｇ５). ５􀆰１􀆰４　无水硫酸镁(MgSO４,CAS号:７４８７Ｇ８８Ｇ９). ５􀆰２　标准品 蘑菇醇(C８H１６O,CAS号:３３９１Ｇ８Ｇ４)标准品:纯度≥９８％. ５􀆰３　标准溶液配制 ５􀆰３􀆰１　蘑菇醇标准储备溶液(１０００mg/L):称取蘑菇醇标准品０􀆰１g(精确至０􀆰００１g),用甲醇溶解并定 容至１００mL.－１８℃保存,有效期６个月. ５􀆰３􀆰２　蘑菇醇标准工作溶液:准确移取一定量的蘑菇醇标准储备溶液(５􀆰３􀆰１),用乙腈(５􀆰１􀆰１)逐级稀释 得到一系列的标准工作溶液,质量浓度分别为０􀆰０１mg/L、０􀆰０２５mg/L、０􀆰１mg/L、０􀆰２５mg/L、０􀆰５mg/L、 １􀆰０mg/L),现用现配. ５􀆰４　材料 ５􀆰４􀆰１　乙二胺ＧNＧ丙基硅烷化硅胶(PSA):４０μm~６０μm. ５􀆰４􀆰２　有机系微孔滤膜:１３mm×０􀆰２２μm. ６　仪器和设备 ６􀆰１　气相色谱三重四级杆串联质谱仪:配置有电子轰击电离源(EI). ６􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１g和０􀆰０００１g. １NY/T４５０７—２０２５ ６􀆰３　振荡器:转速不低于２００r/min. ６􀆰４　离心机:转速不低４０００r/min. ６􀆰５　涡旋混合器. ６􀆰６　均质机. ６􀆰７　粉碎机. ６􀆰８　标准网筛:０􀆰９mm. ７　分析步骤 ７􀆰１　试样制备 ７􀆰１􀆰１　鲜样 取适量食用菌鲜样,用干净纱布轻轻擦去表面附着物,切碎后,放置于均质机(６􀆰６)中粉碎成匀浆状, －１８℃密封保存. ７􀆰１􀆰２　干样 取适量食用菌干样,先取部分放置于粉碎机(６􀆰７)中粉碎,弃去,剩余部分再放置于粉碎机(６􀆰７)中粉 碎,过０􀆰９mm标准网筛(６􀆰８),于密封容器中常温保存备用. ７􀆰２　提取 ７􀆰２􀆰１　鲜样 称取解冻至室温的试样１０g(精确至０􀆰０１g)于５０mL离心管中,准确加１０mL乙腈(５􀆰１),在振荡器 (６􀆰３)上以２００r/min转速振摇５min后,加入４g硫酸镁、１g氯化钠,快速振荡１min后,４０００r/min离 心５min.上清液待净化. ７􀆰２􀆰２　干样 称取０􀆰５g试样(精确至０􀆰００１g),置于５０mL离心管中,加入１０mL水摇匀后静置１０min,在振荡 器(６􀆰３)上以２００r/min转速振摇５min后,加入４g硫酸镁、１g氯化钠,快速振荡１min后,４０００r/min 离心５min.上清液待净化. ７􀆰３　净化 准确吸取５mL上清液于含有９００mg硫酸镁、１５０mgPSA的１５mL离心管中,涡旋混匀１min, ４０００r/min离心５min.取１mL净化液过有机系微孔滤膜(５􀆰４􀆰２)于２mL进样小瓶中,待气相色谱三 重四级杆串联质谱仪(６􀆰１)测定. ７􀆰４　测定 ７􀆰４􀆰１　色谱参考条件 a)　色谱柱:聚乙二醇毛细管柱(３０m×０􀆰２５mm×０􀆰２５μm),或相当规格色谱柱; b)进样口温度:２１０℃; c)柱温箱温度:初始温度５０℃保持２min,以１５℃/min升温至１７０℃,再以３０℃/min升温至 ２１０℃,保持３min; d)载气:氦气,纯度≥９９􀆰９９９％,流速１􀆰０mL/min; e)进样方式和进样量:不分流进样,进样量１μL. ７􀆰４􀆰２　质谱参考条件 a)离子源温度:２５０℃; b)传输线温度:２５０℃; c)电子轰击源:５０eV; d)碰撞气:氩气,纯度≥９９􀆰９９９％; e)扫描模式:选择反应监测扫描(SRM),定量离子对:m/z＝７２/４３,碰撞电压１０eV,定性离子对: m/z＝７２/５７,碰撞电压１０eV. ２NY/T４５０７—２０２５ ７􀆰４􀆰３　标准曲线的绘制 用蘑菇醇系列标准工作溶液(５􀆰３􀆰２),以上述仪器条件(７􀆰４􀆰１、７􀆰４􀆰２)进行测定,以标准工作溶液的质 量浓度为横坐标、峰面积为纵坐标绘制蘑菇醇的标准曲线.蘑菇醇标准工作溶液的选择反应监测(SRM) 色谱图见附录A. ７􀆰４􀆰４　定性测定 在相同试验条件下进行样品测定时,被测试样中蘑菇醇色谱峰的保留时间与相似浓度下标准品保留 时间的相对偏差在±２％以内.同时在扣除背景后的样品质谱图中,蘑菇醇的质谱定量和定性离子均出 现,而且同一检测批次,样品中蘑菇醇的定性离子和定量离子的相对丰度比与质量浓度相当的标准溶液相 对偏差在±１５％以内,则可判断样品中存在蘑菇醇. ７􀆰４􀆰５　定量检测 外标法定量.将标准工作溶液和试样溶液依次注入气相色谱串联质谱仪中,保留时间和离子对定 性,测得定量离子峰面积,待测样液中蘑菇醇的响应值应在仪器检测的定量测定线性范围之内,超过线性 范围时应根据测定浓度进行适当倍数稀释后再进行分析. ７􀆰５　空白试验 除不加试样外,采用完全相同的测定步骤进行平行操作. ８　结果计算 试样中的蘑菇醇含量以质量分数w计,数值以毫克每千克(mg/kg)表示,按公式(１)计算: w＝ρ－ρ０( )×V×f×１０００ m×１０００(１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ρ———由标准曲线得出的试样溶液中蘑菇醇质量浓度的数值,单位为毫克每升(mg/L); ρ０———由标准曲线得出的空白试验溶液中蘑菇醇质量浓度的数值,单位为毫克每升(mg/L); V———提取溶液体积的数值,单位为毫升(mL); m———试样的质量数值,单位为克(g); f———稀释倍数; １０００———换算系数. 计算结果以重复性条件下获得的２次独立测定结果的算术平均值表示,保留小数点后２位.质量浓 度超过１mg/kg时,最多保留３位有效数字. ９　其他 ９􀆰１　精密度 在重复性条件下获得的２次独立测试结果的绝对差值不超过算术平均值的２０％. ９􀆰２　方法定量限 方法的定量限:鲜样为０􀆰２０mg/kg,干样为２􀆰００mg/kg. ３NY/T４５０７—２０２５ 附　录　A (资料性) 蘑菇醇全扫描质谱图和SRM色谱图 　 A􀆰１　１０mg/L蘑菇醇标准工作溶液的全扫描质谱图 见图A􀆰１. 图A􀆰１　１０mg/L蘑菇醇标准工作溶液的全扫描质谱图 A􀆰２　０􀆰５０mg/L蘑菇醇标准工作溶液的SRM色谱图 见图A􀆰２. 图A􀆰２　０􀆰５０mg/L蘑菇醇标准工作溶液的SRM色谱图 ４