2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 月 季 霜 霉 病 抗 性 鉴 定 技 术 规 程 0 5 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 0 2 0 . 2 0 C C S B 4 5 1 0 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l c o d e o f p r a c t i c e f o r i d e n t i f i c a t i o n o f r e s i s t a n c e t o r o s e d o w n y m i l d e w （ P e r o n o s p o r a s p a r s a B e r k . ） Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４５１０—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部种植业管理司提出并归口. 本文件起草单位:云南省农业科学院花卉研究所、国家观赏园艺工程技术研究中心、农业农村部花卉 产品质量监督检验测试中心(昆明)、云南省花卉工程技术研究中心、云南省花卉育种重点实验室、全国农 业技术推广服务中心、云南大学、中国农业大学. 本文件主要起草人:王丽花、杨秀梅、瞿素萍、王继华、刘哲、张艺萍、张钊、许凤、王其刚、吴学尉、张丽 芳、苏艳、蒋亚莲、单芹丽. ⅠNY/T４５１０—２０２５ 月季霜霉病抗性鉴定技术规程 １　范围 本文件规定了月季(Rosaspp􀆰)种质对霜霉病(病原菌PeronosporasparsaBerk􀆰)抗性鉴定的技术方 法和程序,包括设施设备及耗材、病原物接种体制备、鉴定方法、病情调查、抗性评价和鉴定完成后材料的 处理. 本文件适用于室内人工接种鉴定和评价月季种质对霜霉病的抗性. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. NY/T３１１４􀆰３—２０１７　大豆抗病虫性鉴定技术规范　第３部分:大豆抗霜霉病鉴定技术规范 ３　术语和定义 NY/T３１１４􀆰３—２０１７界定的以及下列术语和定义适用于本文件.为了便于使用,以下重复列出了 NY/T３１１４􀆰３—２０１７中界定的术语和定义. ３􀆰１ 月季霜霉病　rosedownymildew 月季霜霉病是一种卵菌病害,其病原物为蔷薇霜霉菌(PeronosporasparsaBerk􀆰),属藻界卵菌门卵 菌纲霜霉目霜霉科霜霉属专性寄生菌.主要危害叶片、嫩梢、花梗及花,病斑黄褐色或灰褐色,空气潮湿时 在叶背病斑处可见灰白色霜状霉层,病斑呈多角形渐变为灼烧状,初期直径２mm~６mm,严重时整株叶 片脱落,新梢枯死. ３􀆰２ 抗病性鉴定　identificationofdiseaseresistance 通过适宜技术方法鉴定植株对特定病害的抵抗能力. [来源:NY/T３１１４􀆰３—２０１７,２􀆰３] ３􀆰３ 抗性评价　evaluationofresistance 根据采用的技术标准判别植物对特定病害侵染后的发病程度和抵抗水平. [来源:NY/T３１１４􀆰３—２０１７,２􀆰４,有修改] ３􀆰４ 病情指数　diseaseindex 衡量植株发病率和严重度的综合指标.通过对植株个体发病程度(病情级别)数值的综合计算所获得 的群体发病程度的数值化描述形式,记作DI. ３􀆰５ 病原物接种体　pathogenicinoculum 用于接种以引起特定病害的病原物或病原物的繁殖体. ３􀆰６ 孢子悬浮液　inoculumsuspension 特定病原菌用无菌水洗脱后用于接种的定量接种体稀释液. １NY/T４５１０—２０２５ [来源:NY/T３１１４􀆰３—２０１７,２􀆰９,有修改] ４　设施设备及耗材 ４􀆰１　设施设备 隔离温室、鉴定室、恒温培养箱、冰箱、灭菌锅、超净工作台、显微镜、移液器、血球计数板等. ４􀆰２　耗材 接种盘、培养皿、锥形瓶、纱布、酒精灯、穴盘、保鲜膜、滤纸等. ５　病原物接种体制备 ５􀆰１　病原物采集和鉴定 田间采集具有典型病症的月季霜霉病叶片,放入封口袋密封并登记编号带回实验室.挑取叶背面霉 层制作分离物显微观察玻片,在生物显微镜下开展病原菌形态学鉴定,确认为月季霜霉病病原物后,经科 赫氏法则(Koch’spostulates)验证保存备用.月季霜霉病病原菌相关资料见附录A. ５􀆰２　接种病原物纯化 鉴定为携带月季霜霉病菌的叶片用灭菌蒸馏水冲洗,应着重冲洗叶片病斑处的老霉层,然后叶背朝上 平铺于经灭菌水湿润过的滤纸上,黑暗保湿培养,培养条件为温度(１８±２)℃,空气相对湿度１００％.３d~ ５d后置于１８００lx~３２００lx的光照条件下,待病斑长出大量灰白色霉层时,用灭菌毛笔蘸无菌水,将病 斑上新形成的霉层(孢子囊)刷于无菌培养皿中,获得纯化的病原物接种体分离物. ５􀆰３　病原物繁殖 在分离物少的情况下,应进行病原物接种体的繁殖.选择感病品种中度成熟叶片,自来水冲洗后无菌 水冲洗１次~２次,７５％酒精表面消毒２０s~３０s.将叶片背面朝上置于灭菌瓷盘或塑料盘中,盘底部附 有浸透无菌水的滤纸,并用无菌细针对每片叶集中针刺２次~３次,造成细小伤口.用无菌移液器吸取接 种液,滴于针刺部位１滴~２滴,每滴１５μL~２０μL,用保鲜膜封严繁殖接种盘,置于温度为(１８±２)℃,空 气相对湿度为８５％~９０％的培养室,５d~７d可获得布满月季霜霉病孢子囊的大量病叶.孢子囊收集同 ５􀆰２. ５􀆰４　病原物保存 可活体保存或病叶冷冻保存.中短期菌种保存时宜采用活体保存,即在适宜环境条件下,定期将月季 霜霉菌人工接种于感病寄主上保存.长期菌种保存时宜采用病叶冷冻保存,即将病叶放入有１０％甘油的 冻存管储藏于液氮中,并定期更换或补充液氮. ６　鉴定方法 ６􀆰１　鉴定室 人工接种鉴定室应具备人工调节温度、湿度及光照条件,使人工接种后具备良好的发病环境.温度可 调范围为１℃~３５℃,湿度可调范围为６０％~１００％,光照可调范围为２０００lx~６０００lx或黑暗. ６􀆰２　鉴定材料的数量 每份鉴定材料重复３次,每一次重复１０株苗或２０片生长状态较一致的叶片. ６􀆰３　鉴定对照材料要求 应分别设１个~２个高抗月季种质为抗病对照,１个~２个高感月季种质为感病对照,同时设置空白 对照.推荐性抗、感月季种质材料见附录B. ６􀆰４　鉴定材料准备 ６􀆰４􀆰１　驯化组培苗 对照品种、待鉴定品种取茎段为外植体,经组培技术手段获得生根苗,移栽至隔离温室中专门划定的 区域进行炼苗驯化.驯化基质为经消毒的泥炭(规格０mm~１０mm)、蛭石(规格１mm~６mm)、珍珠岩 (规格３mm~６mm)、细河沙等组成的混合基质,推荐配方泥炭∶蛭石∶珍珠岩按４∶３∶３配比,或河 ２NY/T４５１０—２０２５ 沙∶泥炭∶珍珠岩＝１∶１∶１(体积比),调整为pH５􀆰５~６􀆰５,EC＜０􀆰３mS/cm－１.移栽后５d~７d为缓 苗期,空气相对湿度控制为８５％~９５％,缓苗期后湿度控制为７０％~８０％;温度白天控制在２３℃~２６ ℃,夜间控制在１５℃~１８℃;光照２０００lx~６０００lx.炼苗８０d~９０d后选择苗高≥２０cm,接枝茎节数 ≥５个,具有４片以上展开五小叶复叶,生长健壮、一致的种苗备用. ６􀆰４􀆰２　扦插苗 选用无病虫害、生长健壮、苗龄一致、无混杂的市售或自培扦插种苗,每株种苗苗高≥２５cm,接枝茎 节数≥５个,具有４片以上展开五小叶复叶. ６􀆰４􀆰３　离体叶片 选择植株中上部生长状态较一致的健康展开叶,用自来水冲洗后,７５％酒精表面消毒叶片２０s~３０ s,再用无菌水冲洗干净后置于无菌滤纸,背面朝上,晾干待用. ６􀆰５　接种 ６􀆰５􀆰１　接种时期 达到６􀆰４接种材料要求后即可进行接种,接种时间宜在傍晚进行. ６􀆰５􀆰２　接种浓度 接种体悬浮液的游动孢子数为(１~１􀆰５)×１０４个/mL,４℃~６℃放置２h,现用现配,悬浮液载体为 无菌水. ６􀆰５􀆰３　接种方法 ６􀆰５􀆰３􀆰１　喷雾接种法 月季组培苗或扦插苗植株采用喷雾接种法.将制成的接种体悬浮液用喷雾器喷雾接种于鉴定材料植 株叶片的正面和背面,重点喷叶片背面,接种量控制为喷施至叶尖有水滴溢出为宜.接种后套袋保湿, ３d~６d后揭去袋子. ６􀆰５􀆰３􀆰２　液滴接种法 叶片采用液滴接种法.将６􀆰４􀆰３准备好的叶片背面朝上置于灭菌瓷盘或塑料盘中,盘底部附有浸透 无菌水的滤纸,用无菌移液器吸取接种体悬浮液,每片叶滴１滴~２滴,每滴１５μL~２０μL,接种完成后接 种盘用保鲜膜封严. ６􀆰５􀆰３􀆰３　空白对照采用无菌水代替游动孢子悬浮液进行接种. ６􀆰５􀆰４　接种后管理 ６􀆰５􀆰４􀆰１　接种植株置于隔离鉴定温室内,温度保持为１４℃~２０℃,空气相对湿度≥８０％,每天植株套袋 表面喷雾无菌水１次保湿,正常水肥管理. ６􀆰５􀆰４􀆰２　离体叶片接种盘置于光照培养箱或鉴定培养室内,黑暗２４h后每天光照１４h,空气相对湿度≥ ８０％,温度１４℃~２０℃. ７　病情调查 ７􀆰１　调查时间 月季组培苗或扦插苗植株接种４d~６d后调查病情,叶片接种３d~４d后调查病情