2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 猫 嵌 杯 病 毒 感 染 诊 断 技 术 4 1 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 1 1 . 2 2 0 C C S B 4 6 6 0 — 2 0 2 5 D i a g n o s t i c t e c h n i q u e s f o r f e l i n e c a l i c i v i r u s i n f e c t i o n Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４６６０—２０２５ 目　　次 前言 Ⅱ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 引言 Ⅲ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 １　范围 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ２　规范性引用文件 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ３　术语和定义 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ４　缩略语 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ５　临床诊断 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ６　样品采集、保存、运输和处理 ２ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ７　病毒分离与鉴定 ４ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ８　荧光RTＧRAA ５ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ９　反转录聚合酶链式反应(RTＧPCR) ６ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 １０　实时荧光RTＧPCR ７ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 １１　综合判定 ８ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录A(资料性)　主要临床症状和CPE参考图 ９ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录B(规范性)　试剂配制 １０ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录C(资料性)　FCVRTＧPCR检测示意图 １１ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录D(资料性)　FCV实时荧光RTＧPCR检测示意图 １２ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ⅠNY/T４６６０—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC１８１)归口. 本文件起草单位:上海市动物疫病预防控制中心、中国农业科学院上海兽医研究所、青岛农业大学、中 国农业科学院北京畜牧兽医研究所、派菲尔德(上海)宠物有限公司、上海基灵生物科技有限公司. 本文件主要起草人:赵洪进、杨德全、刘光清、单虎、梁瑞英、王建、刘健、杨显超、李鑫、孟春春、夏炉 明、鞠厚斌、葛菲菲、沈海潇、龚国华、陶田谷晟、张洪亮、汤新明、白艺兰、牛光斌、李杰、梁琳. ⅡNY/T４６６０—２０２５ 引　　言 猫嵌杯病毒感染(felinecalicivirusinfection)是由猫嵌杯病毒(felinecalicivirus,FCV)感染猫科动物 引起的以结膜炎、口腔溃疡和上呼吸道炎症等为主要特征的一种急性、高度接触性呼吸道传染病.我国农 业农村部将其列为三类动物疫病. 猫嵌杯病毒主要感染猫科动物,如猫、虎、狮和猎豹等.患病动物和隐性带毒动物是主要传染源.主 要经呼吸道和消化道传播,被污染的水、食物、笼具、垫料、环境和带毒的动物等均可成为主要的传播媒介. 猫嵌杯病毒属于杯状病毒科(Caliciviridae)水疱疹病毒属(Vesivirus),目前只有一个血清型,但毒 力、抗原性和遗传性差异很大.引起的疾病除了具有典型的呼吸道症状外,还能引起致死性全身性疾病 (virulentsystemicdisease,VSD)和流行性出血热样疾病,呈现出不同的临床症状.猫嵌杯病毒感染与其 他呼吸道传染病,如猫疱疹病毒１型感染、猫衣原体病、猫支原体病、支气管败血波氏杆菌病等在临床上很 难区别,必须通过病原学和分子生物学等实验室方法才能确诊. 本文件建立了猫嵌杯病毒感染的诊断方法,从临床诊断、病毒学、分子生物学等方面全面制定了猫嵌 杯病毒的诊断方法,适用于猫嵌杯病毒感染的检测和诊断. ⅢNY/T４６６０—２０２５ 　 　 　猫嵌杯病毒感染诊断技术 １　范围 本文件描述了猫嵌杯病毒感染的临床诊断,样品采集、保存、运输和处理,以及病毒分离与鉴定、荧光 RTＧRAA、反转录聚合酶链式反应(RTＧPCR)和实时荧光RTＧPCR等实验室诊断方法. 本文件适用于猫嵌杯病毒感染的检测和诊断. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用本文件. GB１９４８９　实验室　生物安全通用要求 NY/T５４１　兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　缩略语 下列缩略语适用于本文件. BHQ１:黑洞淬灭剂１(blackholequencherＧ１) CPE:细胞病变(cytopathiceffect) Ct值:阈值循环数(cyclethreshold) DEPC:焦碳酸二乙酯(diethylpyrocarbonate) DMEM:杜氏改良Eagle培养基(dulbecco＇smodifiedeaglemedium) EDTA:乙二胺四乙酸(ethylenediaminetetraaceticacid) F８１:猫肾传代细胞系(felinekidneyＧ８１cellline) FAM:６Ｇ羧基荧光素(６Ｇcarboxyfluorescein) FCV:猫嵌杯病毒(felinecalicivirus) PBS:磷酸盐缓冲液(phosphateＧbufferedsalinebuffer) pH:酸碱值(pondushydrogenii) RNA:核糖核酸(ribonucleicacid) RTＧPCR:反转录聚合酶链式反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction) RTＧRAA:反转录重组酶介导的等温核酸扩增技术(reversetranscriptionrecombinaseaidedamplifiＧ cation) TCID５０:半数组织培养感染剂量(mediantissuecultureinfectivedose) VSD:致死性全身性疾病(virulentsystemicdisease) ５　临床诊断 ５􀆰１　流行病学 ５􀆰１􀆰１　常见的猫科动物,如猫、虎、狮和猎豹等均易感,幼龄动物最易感. ５􀆰１􀆰２　传染源主要为患病动物和隐性带毒动物,主要经呼吸道和消化道传播,被污染的水、食物、笼具、垫 料、环境和带毒的动物等均可成为传播媒介. １NY/T４６６０—２０２５ ５􀆰１􀆰３　一年四季均可发生,春秋季节多发. ５􀆰２　临床症状 ５􀆰２􀆰１　精神沉郁,反应迟钝;轻度跛行;出现反复吞咽动作、进食困难、发热(３９􀆰５℃~４０􀆰５℃)、打喷嚏, 呼吸困难等呼吸道症状. ５􀆰２􀆰２　眼鼻分泌物增多、口腔溃疡及大量流涎(见附录A中的A􀆰１),口腔溃疡是FCV感染的最显著的 特征,嘴唇、舌和硬腭、腭中裂周围明显出现大面积的溃疡(见A􀆰２). ５􀆰２􀆰３　高致病性毒株感染可致猫科动物出现VSD,临床不仅表现为严重高热、呼吸困难等上呼吸道症 状,而且会出现面部及四肢水肿,面部、足部及耳部溃疡及脱毛,出血,跛行,黄疸和肺炎等全身性症状,甚 至能够导致患病动物死亡. ５􀆰３　病理变化 ５􀆰３􀆰１　四肢关节偶见急性滑膜炎,滑膜增厚,关节液增多. ５􀆰３􀆰２　肺腹缘暗红色实变,增生性间质性肺炎. ５􀆰３􀆰３　支气管和细支气管内充满含有蛋白质的液体. ５􀆰３􀆰４　全身性感染病例,可见不同部位的病变,包括皮下水肿,口腔、鼻腔、耳鼓和脚掌等部位有不同程度 的溃疡,凝血异常,肺水肿,肝脏、脾脏和胰腺坏死等其他病理变化. ５􀆰４　鉴别诊断 猫嵌杯病毒感染与猫疱疹病毒Ⅰ型感染、猫衣原体病、猫支原体病、支气管败血波氏杆菌病的临床症 状相似: a)　猫嵌杯病毒感染以口腔溃疡、上呼吸道症状为主; b)　猫疱疹病毒Ⅰ型感染主要表现为咳嗽、打喷嚏、鼻脓性分泌物等上呼吸道症状与结膜炎、溃疡性 角膜炎、溃疡性眼周皮肤炎等眼部症状; c)　猫衣原体病主要表现为结膜充血、水肿、浆液性眼分泌物等典型眼部症状; d)　猫支原体病主要表现结膜炎、上呼吸道症状和慢性支气管炎等为主要症状