2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 混 合 型 饲 料 添 加 剂 防 霉 剂 中 丙 酸 和 丙 酸 盐 的 测 定 高 效 液 相 色 谱 法 4 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 2 0 C C S B 4 6 8 7 — 2 0 2 5 D e t e r m i n a t i o n o f p r o p i o n i c a c i d a n d p r o p i o n a t e i n p r e s e r v a t i v e s a s f e e d a d d i t i v e b l e n d e r — H i g h p e r f o r m a n c e l i q u i d c h r o m a t o g r a p h y Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４６８７—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规 定起草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由中华人民共和国农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口. 本文件起草单位:四川威尔检测技术股份有限公司、江西省农业技术推广中心、重庆民泰新农业科技 发展集团有限公司、通威农业发展有限公司. 本文件主要起草人:张凤枰、张艳红、唐姣、杨发树、万文根、杨梅、符金华、张璐、陶有伦、夏骏、侯玲玲. ⅠNY/T４６８７—２０２５ 混合型饲料添加剂防霉剂中丙酸和丙酸盐 的测定　高效液相色谱法 １　范围 本文件描述了混合型饲料添加剂防霉剂中丙酸和丙酸盐的高效液相色谱测定方法. 本文件适用于混合型饲料添加剂防霉剂中丙酸和丙酸盐的测定. 本文件丙酸和丙酸盐的检出限为０􀆰１％,定量限为０􀆰３％. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　原理 试样中的丙酸和丙酸盐用磷酸溶液提取,高效液相色谱仪测定,外标法定量. ５　试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂. ５􀆰１　水:GB/T６６８２规定的一级水. ５􀆰２　乙腈:色谱级. ５􀆰３　０􀆰１％磷酸溶液:移取１􀆰０mL磷酸,加水稀释、定容至１０００mL,混匀,备用. ５􀆰４　标准储备溶液(１０mg/mL):称取约０􀆰５g(精确至０􀆰１mg)丙酸标准品(CAS号:７９Ｇ０９Ｇ４,纯度≥ ９９􀆰０％)于５０mL容量瓶中,用０􀆰１％磷酸溶液(５􀆰３)溶解,定容,混匀.于２℃~８℃保存,有效期３个月. ５􀆰５　标准系列溶液:准确移取０􀆰１mL、０􀆰２mL、０􀆰５mL、１􀆰０mL、２􀆰０mL、５􀆰０mL标准储备溶液(５􀆰４),分别 置于１００mL容量瓶,用０􀆰１％磷酸溶液(５􀆰３)稀释、定容,混匀,配制成质量浓度分别为０􀆰０１mg/mL、 ０􀆰０２mg/mL、０􀆰０５mg/mL、０􀆰１mg/mL、０􀆰２mg/mL、０􀆰５mg/mL标准系列溶液.临用现配. ５􀆰６　微孔滤膜:０􀆰４５μm,水系. ６　仪器设备 ６􀆰１　高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器. ６􀆰２　分析天平:精度为０􀆰１mg. ６􀆰３　超声波清洗器. ７　样品 取代表性的样品２００g,尽快装入耐酸、耐腐蚀的容器中,立即密封,尽快分析. ８　试验步骤 ８􀆰１　试样溶液制备 １NY/T４６８７—２０２５ ８􀆰１􀆰１　固体型 平行做２份试验.称取０􀆰５g(精确至０􀆰１mg)试样,置于１００mL容量瓶中,立即加入８０mL０􀆰１％ 磷酸溶液(５􀆰３),加塞,摇匀,超声提取１０min,取出,冷却至室温,用０􀆰１％磷酸溶液(５􀆰３)定容,混匀.准 确移取１０mL提取液于１００mL容量瓶中,用０􀆰１％磷酸溶液(５􀆰３)稀释、定容,混匀,过微孔滤膜(５􀆰６), 备用. ８􀆰１􀆰２　液体型 平行做２份试验.称取约０􀆰５g(精确至０􀆰１mg)试样,置于１００mL容量瓶中,立即用０􀆰１％磷酸溶 液(５􀆰３)稀释、定容,混匀.准确移取１０mL提取液于１００mL容量瓶中,用０􀆰１％磷酸溶液(５􀆰３)稀释、定 容,混匀,过微孔滤膜(５􀆰６),备用. ８􀆰２　测定 ８􀆰２􀆰１　高效液相色谱参考条件 高效液相色谱参考条件如下: a)　色谱柱:C１８柱,柱长２５０mm,内径４􀆰６mm,粒径５μm,或性能相当者; b)　流动相:乙腈(５􀆰２)＋０􀆰１％磷酸溶液(５􀆰３)＝５＋９５; c)　流速:１􀆰０mL/min; d)　检测波长:２１０nm; e)　进样量:２０μL; f)　柱温:３０℃. ８􀆰２􀆰２　标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取标准系列溶液(５􀆰５)和试样溶液(８􀆰１)上机测定.丙酸标准溶液的液相 色谱图见附录A. ８􀆰２􀆰３　定性 以保留时间定性,试样溶液中丙酸色谱峰的保留时间应与质量浓度相当的标准系列溶液中丙酸色谱 峰的保留时间一致,其相对偏差在±２􀆰５％之内. ８􀆰２􀆰４　定量 以丙酸的质量浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,其相关系数应不低于０􀆰９９９.试 样溶液中丙酸的质量浓度应在标准曲线的线性范围内.如超出范围,应将试样溶液用０􀆰１％磷酸溶液 (５􀆰３)稀释后重新测定.单点校准定量时,试样溶液中待测物的质量浓度与标准溶液质量浓度相差不超过 ３０％. ９　试验数据处理 试样中丙酸和丙酸盐(以丙酸计)的含量w以质量分数计,单位为百分含量(％).多点校准按公式 (１)计算,单点校准按公式(２)计算. w＝ρ×V×V２×n m×V１×１０００×１００ (１) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 式中: ρ———由标准曲线计算得到的试样溶液中丙酸质量浓度的数值,单位为毫克每毫升(mg/mL); V———试样提取溶液总体积的数值,单位为毫升(mL); V２———试样溶液体积的数值,单位为毫升(mL); n———超出线性范围后的稀释倍数; V１———移取提取溶液体积的数值,单位为毫升(mL); m———试样质量的数值,单位为克(g); １０００———换算系数. w＝A×ρs×V×V２×n As×m×V１×１０００×１００ (２) 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ２NY/T４６８７—２０２５ 式中: A———试样溶液中丙酸色谱峰面积; AS———标准溶液中丙酸色谱峰面积; ρS———丙酸标准溶液的质量浓度,单位为毫克每毫升(mg/mL); 测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留３位有效数字. １０　精密度 在重复性条件下,２次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的５％. ３NY/T４６８７—２０２５ 附　录　A (资料性) 丙酸标准溶液液相色谱图 丙酸标准溶液(０􀆰１mg/mL)液相色谱图见图A􀆰１. 图A􀆰１　丙酸标准溶液(０􀆰１mg/mL)液相色谱图 ４