2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 饲 料 添 加 剂 2 5 - 羟 基 胆 钙 化 醇 （ 2 5 - 羟 基 维 生 素 D 3 ） 4 6 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 6 5 . 1 2 0 C C S B 4 6 8 8 — 2 0 2 5 F e e d a d d i t i v e - 2 5 - H y d r o x y c h o l e c a l c i f e r o l ( 2 5 - H y d r o x y V i t a m i n D 3 ) Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布NY/T４６８８—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定起 草. 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由中华人民共和国农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC７６)归口. 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、帝斯曼维生素(上海)有限公司、 山东海能生物工程有限公司、太原市威尔潞威科技发展有限公司、浙江花园生物高科股份有限公司. 本文件主要起草人:赵小阳、虞哲高、宋荣、张进、曹金党、梁彦明、梁伟杰、朱宁、饶辉、杨素萍、杜海 峰、张健、宋艳、石宝石、何雷、张耀、唐飞、钱国平、姚园园、陈梨花、张辉. ⅠNY/T４６８８—２０２５ 　 　 　饲料添加剂　２５Ｇ羟基胆钙化醇 (２５Ｇ羟基维生素D３) １　范围 本文件给出了２５Ｇ羟基胆钙化醇(２５Ｇ羟基维生素D３)(以下称“２５Ｇ羟基胆钙化醇”)的化学名称、分子 式、相对分子质量和结构式,规定了饲料添加剂２５Ｇ羟基胆钙化醇产品的技术要求、检验规则、标签、包装、 运输、贮存和保质期,描述了采样和试验方法. 本文件适用于以２５Ｇ羟基Ｇ７Ｇ去氢胆固醇为起始原料,经化学制备、精制获得的２５Ｇ羟基胆钙化醇的生 产、销售、检测、认证和监管等. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于本 文件. GB/T６０６　化学试剂　水分测定通用方法　卡尔􀅰费休法 GB/T６０４０　红外光谱分析方法通则 GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 GB/T８１７０　数值修约规则与极限数值的表示和判定 GB１０６４８　饲料标签 GB/T１３０７９　饲料中总砷的测定 GB/T１４６９９􀆰１　饲料　采样 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　化学名称、分子式、相对分子质量和结构式 ４􀆰１　化学名称:(５Z,７E)Ｇ９,１０Ｇ开环胆甾Ｇ５,７,１０(１９)Ｇ三烯Ｇ３β,２５Ｇ二醇一水合物;CAS号:６３２８３Ｇ３６Ｇ３. ４􀆰２　分子式:C２７H４４O２􀅰H２O. ４􀆰３　相对分子质量:４１８􀆰７. 注:按２０１９年国际相对原子质量. ４􀆰４　结构式 见图１. 图１　２５Ｇ羟基胆钙化醇结构式 １NY/T４６８８—２０２５ ５　技术要求 ５􀆰１　外观与性状 白色或类白色粉末状晶体. ５􀆰２　鉴别 试样的红外吸收光谱图与标准品红外吸收光谱图一致,试样液相色谱图与标准液相色谱图中主峰保 留时间一致. ５􀆰３　理化指标 应符合表１的规定. 表１　理化指标 项　　目 指标 ２５Ｇ羟基胆钙化醇(以C２７H４４O２􀅰H２O计),％ ≥９４􀆰０ 相关甾醇类物质 单个甾醇(除预２５Ｇ羟基胆钙化醇外),％ ≤１􀆰０ 水分,％ ３􀆰８~５􀆰０ ５􀆰４　卫生指标 应符合表２的规定. 表２　卫生指标 项目 指标 总砷(以As计),mg/kg ≤２ 重金属(以Pb计),mg/kg ≤２０ ６　取样 按照GB/T１４６９９􀆰１的规定执行,依据批量大小和包装规格,采集份样,形成不少于７５g的总份样, 缩分成３份实验室样品,每份实验室样品不少于２５g,按照９􀆰２中规定进行包装,９􀆰３中规定进行运输,样 品送到实验室后,按９􀆰４中规定储存. ７　试验方法 除非另有规定,仅使用分析纯试剂.水符合GB/T６６８２中规定的三级水. ７􀆰１　外观与性状 取适量样品置于清洁干燥的白瓷盘中,在自然光线下观察其色泽与形态. ７􀆰２　鉴别 ７􀆰２􀆰１　红外光谱法 取２５Ｇ羟基胆钙化醇试样与标准品各约２mg,分别与２２５mg溴化钾进行磨碎压片,按照GB/T６０４０ 的规定,用红外吸收光谱仪在４０００cm－１~４００cm－１波数范围内测定吸收光谱,标准品的红外扫描光谱 图见附录A. ７􀆰２􀆰２　高效液相色谱法 ２５Ｇ羟基胆钙化醇按７􀆰３试验,试样溶液(７􀆰３􀆰４􀆰１)色谱图中主峰的保留时间与标准工作溶液 (７􀆰３􀆰２􀆰５)主峰的保留时间相对偏差在±２􀆰５％范围内.２５Ｇ羟基胆钙化醇标准溶液色谱图见附录B. ７􀆰３　２５Ｇ羟基胆钙化醇含量测定 ７􀆰３􀆰１　原理 试样用甲醇溶解后,经色谱柱分离,在波长２６５nm下,用高效液相色谱测定,外标法定量. ２NY/T４６８８—２０２５ ７􀆰３􀆰２　试剂或材料 ７􀆰３􀆰２􀆰１　水:GB/T６６８２规定的一级水. ７􀆰３􀆰２􀆰２　甲醇:色谱级. ７􀆰３􀆰２􀆰３　甲醇水溶液:V＋V＝８０＋２０. ７􀆰３􀆰２􀆰４　标准储备溶液(１mg/mL):称取２５Ｇ羟基胆钙化醇一水化合物标准品(CAS号:６３２８３Ｇ３６Ｇ３,纯 度不低于９８􀆰０％)２５mg(精确至０􀆰０１mg)于２５mL的棕色容量瓶中,用甲醇溶解并稀释至刻度.－１８ ℃以下保存,有效期６个月. ７􀆰３􀆰２􀆰５　标准工作溶液:准确移取标准储备溶液(７􀆰３􀆰２􀆰４)５mL于５０mL的棕色容量瓶中,用甲醇水溶 液(７􀆰３􀆰２􀆰３)稀释定容.临用现配. ７􀆰３􀆰２􀆰６　微孔滤膜:有机系,０􀆰２μm. ７􀆰３􀆰３　仪器设备 ７􀆰３􀆰３􀆰１　高效液相色谱仪:配有二极管矩阵检测器或紫外检测器. ７􀆰３􀆰３􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１mg. ７􀆰３􀆰４　试验步骤 ７􀆰３􀆰４􀆰１　试样溶液的制备 注意:实验过程在避光条件下进行. 平行做２份试验.称取试样５０mg(精确至０􀆰０１mg),置于５０mL棕色容量瓶中,加入约４０mL甲醇 溶解并定容至刻度,混匀.准确吸取５mL置于５０mL容量瓶中,用甲醇水溶液(７􀆰３􀆰２􀆰３)定容.混匀,用 ０􀆰２μm滤膜过滤,供高效液相色谱仪分析. ７􀆰３􀆰４􀆰２　色谱参考条件 ７􀆰３􀆰４􀆰２􀆰１　色谱柱:ZorbaxEclipseXDBC１８,４􀆰６mm×１５０mm,５μm,或性能相当者. ７􀆰３􀆰４􀆰２􀆰２　流动相:甲醇(７􀆰３􀆰２􀆰２)＋水(７􀆰３􀆰２􀆰１)＝８０＋２０. ７􀆰３􀆰４􀆰２􀆰３　流速:１􀆰０mL/min. ７􀆰３􀆰４􀆰２􀆰４　检测波长:２６５nm. ７􀆰３􀆰４􀆰２􀆰５　进样量:２０μL. 注:ZorbaxEclipseXDB是由安捷伦(Agilent)科技有限公司提供的色谱柱的商品名.给出这一信息是为了方便本文件 的使用者,并不表示对该产品的认可.如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品. ７􀆰３􀆰４􀆰３　测定 在仪器最佳状态下,将标准工作溶液(７􀆰３􀆰２􀆰５)及试样溶液(７􀆰３􀆰４􀆰１)进样,用液相色谱测定,以保留 时间定性,按外标法以色谱峰面积定量.色谱图见附录B. ７􀆰３􀆰４􀆰４　试验数据处理 试样中２５Ｇ羟基胆钙化醇(以C２７H４４O２􀅰H２O计)含量以质量分数w计,数值以百分含量(％)表示, 按式(１)计算. ω＝A×V×C AST×m×１０６×１００ (１) 式中: A———试样溶液中２５Ｇ羟基胆钙化醇峰面积; AST———标准溶液中２５Ｇ羟基胆钙化醇峰面积; V———试样溶液的稀释总体积的数值,单位为毫升(mL); C———２５Ｇ羟基胆钙化醇标准溶液的的质量浓度的数值,单位为微克每毫升(μg/mL); m———试样质量的数值,单位为克(g); 测定结果以平行测定的算术平均值表示,保留至小数点后１位. ７􀆰３􀆰４􀆰５　精密度 ３NY/T４６８８—２０２５ 在重复性条件下,２次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的１％. ７􀆰４　２５Ｇ羟基胆钙化醇中相关甾醇类物质测定 ７􀆰４􀆰１　原理 将试样溶于甲醇,用液相色谱法分离,以相对保留时间定性,测量试样溶液色谱图上各相关甾醇类物 质的峰面积与对照溶液２５Ｇ羟基胆钙化醇的峰面积比较,计算各相关甾醇类物质. ７􀆰４􀆰２　试剂或材料 ７􀆰４􀆰２􀆰１　水:GB/T６６８２规定的一级水. ７􀆰４􀆰２􀆰２　甲醇:色谱级. ７􀆰４􀆰２􀆰３　甲醇水溶液:V＋V＝８０＋２０. ７􀆰４􀆰２􀆰４　微孔滤膜:有机系,０􀆰２μm. ７􀆰４􀆰３　仪器设备 ７􀆰４􀆰３􀆰１　高效液相色谱仪:配有二极管矩阵检测器或紫外检测器. ７􀆰４􀆰３􀆰２　分析天平:感量０􀆰０１mg. ７􀆰４􀆰３􀆰３　恒温水浴锅. ７􀆰４􀆰４　试验步骤 ７􀆰４􀆰４􀆰１　试样溶液 称取２５Ｇ羟基胆钙化醇试样约５０mg(精确至０􀆰０１mg),置于５０mL棕色容量瓶中,加入甲醇 (７􀆰４􀆰２􀆰２)溶解并定容至刻度,混匀. ７􀆰４􀆰４􀆰２　对照溶液 准确移取１mL试样溶液(７􀆰４􀆰４􀆰１)于１００mL的容量瓶中,用甲醇水溶液(７􀆰４􀆰２􀆰３)稀释至刻度摇 匀. ７􀆰４