2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 梅 迪 - 维 斯 纳 病 诊 断 技 术 4 1 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 1 1 . 2 2 0 C C S B 5 6 5 — 2 0 2 5 D i a g n o s t i c t e c h n i q u e s f o r M a e d i - V i s n a Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布 代 替 N Y / T 5 6 5 — 2 0 0 2NY/T５６５—２０２５ 目　　次 前言 Ⅱ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 引言 Ⅲ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 １　范围 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ２　规范性引用文件 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ３　术语和定义 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ４　缩略语 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ５　临床症状 １ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ６　病理变化 ２ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ７　病原学检测 ２ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ８　血清学检测 ５ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ９　综合判定 ７ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 １０　鉴别诊断 ７ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录A(规范性)　病毒分离所需溶液的配制 ８ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录B(资料性)　绵羊脉络丛成纤维细胞的制备 ９ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录C(规范性)　PCR检测相关溶液的配制 １０ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录D(资料性)　PCR和qPCR引物、扩增核酸序列和扩增曲线参考图 １１ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 附录E(规范性)　间接ELISA抗体检测相关溶液的配制 １３ 􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺􀆺 ⅠNY/T５６５—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件代替NY/T５６５—２００２«梅迪Ｇ维斯纳病琼脂凝胶免疫扩散试验方法»,与NY/T５６５—２００２相 比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a)　增加了缩略语(见第４章); b)增加了临床症状(见第５章); c)增加了病理变化(见第６章); d)增加了病原学检测(见第７章); e)增加了间接ELISA抗体检测方法(见８􀆰２); f)增加了综合判定(见第９章); g)增加了鉴别诊断(见第１０章). 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC１８１)归口. 本文件起草单位:中国农业科学院兰州兽医研究所、西南民族大学、中国动物疫病预防控制中心、陕西 省动物疫病预防控制中心. 本文件主要起草人:窦永喜、陈豪泰、刘振东、朱学亮、殷相平、孙跃峰、张志东、孙雨、杨文欢. 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———２００２年首次发布为NY/T５６５—２００２; ———本次为第一次修订. ⅡNY/T５６５—２０２５ 引　　言 梅迪Ｇ维斯纳病(MaediＧVisna,MV)是由梅迪Ｇ维斯纳病毒(MaediＧVisnavirus,MVV)引起绵羊间质 性肺炎或脑膜炎为主要症状的一种慢性传染病.梅迪Ｇ维斯纳为冰岛语,梅迪的意思是“呼吸困难”,描述 了一种增进性间质性肺炎;维斯纳的意思是“抽搐”或“消耗”,症状为麻痹性脑膜炎.世界动物卫生组织 (WOAH)将该病列为法定报告动物疫病,我国将其列为三类动物疫病.我国在１９６６—１９６７年因引入种 羊而传入该病,之后在部分省份有发病报道. 本文件的临床症状和病理变化部分主要参考«兽医微生物学»(陆承平主编,第五版)、«兽医传染病» (陈溥言主编,第六版)及世界动物卫生组织(WOAH)«陆生动物诊断试验和疫苗手册»(２０２２年版),琼脂 凝胶免疫扩散试验方法在原«梅迪Ｇ维斯纳病琼脂凝胶免疫扩散试验方法»(NY/T５６５—２００２)的基础上进 一步细化修订,病原学和其他血清学诊断方法主要参考世界动物卫生组织(WOAH)«陆生动物诊断试验 和疫苗手册»(２０２２年版)并结合近年来该病研究新成果的基础上进行优化和验证后制定. 梅迪Ｇ维斯纳病与山羊关节炎脑炎病原均属于慢病毒,两种病毒基因组核酸序列具有较高的同源性, 血清交叉反应性也很高,可通过感染物种、临床症状进行初步鉴别,再根据病毒核酸检测结果或病毒基因 测序结果进行确诊. ⅢNY/T５６５—２０２５ 　 　 　梅迪Ｇ维斯纳病诊断技术 １　范围 本文件规定了梅迪Ｇ维斯纳病临床症状、病理变化及其病原学和血清学检测方法的技术要求. 本文件适用于梅迪Ｇ维斯纳病的诊断、检测、监测和流行病学调查. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用本文件. GB/T６６８２　分析实验室用水规格和试验方法 ３　术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义. ４　缩略语 下列缩略语适用于本文件. AGID:琼脂凝胶免疫扩散(agargelimmunodiffusion) CPE:细胞病变效应(cytopathiceffect) Ct:循环阈值(cyclethreshold) DMEM:细胞基础培养液(dulbecco′smodifiedeaglemedium) DNA:脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid) ELISA:酶联免疫吸附试验(enzymeＧlinkedimmunosorbentassay) MV:梅迪Ｇ维斯纳病(maediＧVisna) MVV:梅迪Ｇ维斯纳病毒(maediＧVisnavirus) OD:光密度(opticaldensity) PCR:聚合酶链式反应(polymerasechainreaction) PBS:磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline) qPCR:实时定量PCR(quantitativerealＧtimePCR) TAE:TrisＧ乙酸ＧEDTA缓冲液(trisacetateEDTAbufferedsolution) ５　临床症状 ５􀆰１　梅迪病(呼吸型) ５􀆰１􀆰１　多发生于３岁以上的绵羊,病程长,通常为４个月~８个月,有的可达数年. ５􀆰１􀆰２　初期病羊行动迟缓,上坡时常落后于羊群,呼吸频率加快;后期严重时鼻孔扩张,伸颈仰头,呼吸急 迫,常持站立姿势,除辅助呼吸肌参与呼吸过程外,头部和肋部经常出现有节奏的跳动,偶发干咳;听诊可 在肺的内侧听到啰音,叩诊肺腹侧呈现实音. ５􀆰１􀆰３　病羊体重逐渐下降,虚弱消瘦;体温正常,食欲减退;轻度贫血,持续性白细胞增多.最后因缺氧和 继发细菌性肺炎死亡,病死率高达１００％. ５􀆰２　维斯纳病(脑炎型) ５􀆰２􀆰１　多见于２岁以上的成年羊,偶见于１年以内的幼年羊. ５􀆰２􀆰２　早期病羊表现后肢步态不稳、共济失调,容易摔倒,之后发展为后肢轻度瘫痪;随着病程缓慢发展, １NY/T５６５—２０２５ 后肢由轻瘫逐渐发展为完全截瘫,嘴唇震颤,体况迅速恶化.发病后数周至数月内死亡. ６　病理变化 ６􀆰１　梅迪病(呼吸型) ６􀆰１􀆰１　剖检变化:肺膨大,大小和重量是正常肺的２倍~４倍,表面可见肋弓压痕,呈灰黄至灰蓝色,如海 绵状,切面干燥;气管、支气管和纵隔淋巴结肿大,为正常的２倍~４倍. ６􀆰１􀆰２　组织学变化:显著特征是肺间质淋巴样增生,肺泡壁增厚.随着病程发展,还可出现平滑肌纤维、 结缔组织和上皮细胞增生.镜检可见血管周围、细支气管周围及肺泡内有淋巴细胞、单核细胞及巨噬细胞 的弥漫性浸润,甚至形成淋巴结节,部分淋巴结节中出现生发中心或淋巴滤泡. ６􀆰２　维斯纳病(脑炎型) ６􀆰２􀆰１　剖检变化:无特异性病理变化,病期长的主要表现后肢肌肉萎缩. ６􀆰２􀆰２　组织学变化:局限于中枢神经系统,呈弥漫性脑脊髓炎,淋巴细胞浸润及小神经胶质细胞增生,血 管周围可见“套袖现象”;脑脊液中淋巴细胞增多,单核细胞数可达４０个/mm３~２０００个/mm３;大脑、小 脑、脑桥、延脑及脊髓出现脱髓鞘现象. ７　病原学检测 ７􀆰１　病毒分离 ７􀆰１􀆰１　主要仪器和设备 ７􀆰１􀆰１􀆰１　二氧化碳培养箱. ７􀆰１􀆰１􀆰２