2 0 2 5 0 1 0 9 发 布 － － 2 0 2 5 0 5 0 1 － － 实 施 高 致 病 性 禽 流 感 样 品 采 集 、 保 存 及 运 输 技 术 规 范 4 1 中 华 人 民 共 和 国 农 业 行 业 标 准 备 案 号 ： X X X X - X X X X Ｉ Ｃ Ｓ 1 1 . 2 2 0 C C S B 7 6 5 — 2 0 2 5 T e c h n i c a l s p e c i f i c a t i o n f o r c o l l e c t i o n , s t o r a g e a n d t r a n s p o r t a t i o n o f h i g h l y p a t h o g e n i c a v i a n i n f l u e n z a s p e c i m e n s Ｎ Ｙ ／ Ｔ 中 华 人 民 共 和 国 农 业 农 村 部 发 布 代 替 N Y / T 7 6 5 — 2 0 0 4NY/T７６５—２０２５ 前　　言 本文件按照GB/T１􀆰１—２０２０«标准化工作导则　第１部分:标准化文件的结构和起草规则»的规定 起草. 本文件代替NY/T７６５—２００４«高致病性禽流感样品采集、保存和运输技术规范»,与NY/T７６５— ２００４相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了范围(见第１章); ———更改了规范性引用文件(见第２章,２００４年版的第２章); ———增加了术语和定义(见第３章); ———更改了采样前准备(见第４章,２００４年版的第３章); ———更改了样品采集(见第５章,２００４年版的第４章); ———更改了样品包装(见第５章,２００４年版的第４章); ———更改了样品保存和运输(见第６章和第７章,２００４年版的第５章); ———更改了附录A、B(见附录A、B,２００４年版的附录A、B); ———增加了附录C(见附录C); 请注意本文件的某些内容可能涉及专利.本文件的发布机构不承担识别专利的责任. 本文件由农业农村部畜牧兽医局提出. 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC１８１)归口. 本标准起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、中国农业科学院哈尔滨兽医研究所、中国动物疫病 预防控制中心. 本标准起草人:李阳、于晓慧、蒋文明、邓国华、刘伟、尹馨、施建忠、刘朔、彭程、王静静、陈丕英、李金 平、袁丽萍、侯广宇、刘华雷. 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———２００４年第一次发布为NY/T７６５—２００４; ———本次为第一次修订. ⅠNY/T７６５—２０２５ 高致病性禽流感样品采集、保存及运输技术规范 １　范围 本文件规定了高致病性禽流感样品釆集、保存和运输的技术要求. 本文件适用于疑似或确诊高致病性禽流感样品的采集、保存及运输. ２　规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款.其中,注日期的引用文件, 仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用本文件. NY/T７６６　高致病性禽流感无害化处理技术规范. NY/T７６８　高致病性禽流感人员防护技术规范. ３　术语和定义 下列术语和定义适用于本文件. ３􀆰１ 样品　specimen 取自动物或环境,拟通过检测反映动物个体、群体或环境有关状况的材料或物品. ３􀆰２ 采样　sampling 按照规定的程序和要求,从动物或环境取得一定量的样品,并经过适当的处理,留做待检样品的过程. ３􀆰３ 抽样单元　samplingunit 同一饲养地、同一饲养条件下的动物群体或个体,同一产地、同一批次的动物产品. ３􀆰４ 随机抽样　randomsampling 按照随机原则(总体中每一个观察单位都有同等的机会被选入样品中),从总体中抽取部分观察单位 的过程. ４　采样前准备 ４􀆰１　釆样人员 从事样品采集的人员应经过生物安全培训并考核合格,熟练掌握采样工作程序和采样操作技术.采 样时应严格按照操作流程进行采样,做好样品信息记录,确保样品质量符合要求、样品及相关信息可追溯. ４􀆰２　采样器具 ４􀆰２􀆰１　应根据所采集样品的种类和数量的需求,选择不同的采样工具、器械及容器等,并进行适量包装. ４􀆰２􀆰２　采样工具和盛样器具应做灭菌处理,并保持洁净、干燥. ４􀆰２􀆰２􀆰１　解剖刀、剪刀、镊子等用具应经高压蒸汽(１０３􀆰４３kPa,１２１℃±０􀆰５℃,１５min~３０min)或 １００℃蒸馏水煮沸灭菌３０min或干热灭菌１２０℃６０min,应急无灭菌用具可临时用７５％酒精擦拭或进 行火焰灭菌处理. ４􀆰２􀆰２􀆰２　应使用无菌一次性针头、注射器和采样拭子. ４􀆰３　样品保存液 样品保存液配制方法按照附录A的规定执行,经１０３􀆰４３kPa、１２１℃高压灭菌２０min后分装到２mL １NY/T７６５—２０２５ 采样管中,每管１􀆰２mL储存备用. ４􀆰４　采样记录和防护材料 不干胶标签、签字笔、记号笔、采样单、记录本等;医用外科口罩、一次性手套、采样袋、乳胶手套、防护 服、防护帽、胶靴(防护鞋套)、垫布、７５％酒精消毒液、生物安全垃圾袋等. ５　样品釆集 ５􀆰１　采样原则 ５􀆰１􀆰１　合理选择采样方法 ５􀆰１􀆰１􀆰１　应根据采样的目的、内容和要求合理选择样品采集的种类、数量、部位与抽样方法.样品数量应 满足流行病学调查和生物统计学的要求. ５􀆰１􀆰１􀆰２　诊断或被动监测时,应选择症状典型或具有明显病变/发病征兆的禽只,采集组织样品、疑似污 染物. ５􀆰１􀆰１􀆰３　主动监测时,应采集口咽拭子和泄殖腔拭子,根据禽只日龄、季节、免疫接种史、周边疫情情况估 计其流行率,确定抽样单元.在抽样单元内,应遵循随机抽样原则. ５􀆰１􀆰２　采样时限 采集死亡动物的样品,最佳采集时间为动物死亡后２h内.夏天不应超过６h,冬天不应超过２４h. ５􀆰１􀆰３　无菌操作 采样过程应注意无菌操作,解剖刀、剪刀、镊子、器皿、注射器、针头等采样用具应事先灭菌,每种样品 应单独采集. ５􀆰１􀆰４　减少应激和损害 活体动物采样时,应动作轻柔,避免过度刺激或损害动物,减少应激. ５􀆰１􀆰５　生物安全防护 采样人员应按NY/T７６８的要求加强个人防护,严格遵守生物安全操作的相关规定;同时,应做好环 境消毒,并按NY/T７６６的要求对动物或组织进行无害化处理,避免污染环境,防止动物疫病传播. ５􀆰２　拭子样品采集 ５􀆰２􀆰１　采集口咽拭子时,应将拭子深入喉头及上颚裂来回旋转３次~５次,沾取分泌液.口咽拭子的样 品保存液中抗生素浓度按照附录A的规定配制. ５􀆰２􀆰２　采集泄殖腔拭子时,应将拭子深入泄殖腔约１􀆰５cm~２cm,至少旋转３圈.尽可能沾取到组织黏膜 细胞碎片,并沾取少量粪便.泄殖腔拭子的样品保存液中抗生素浓度应提高至１０倍,配制方法按照附录A 的规定执行. ５􀆰２􀆰３　将采样后的拭子头部按样品编号分别浸入含有１􀆰２mL样品保存液(配制方法按照附录A的规定 执行)的２mL采样管中,尾部弃去,盖紧管盖,用封口膜封口防止液体溢出,并填写相应采样单. ５􀆰２􀆰４　对于鸽、珍禽等体型较小的禽鸟,采样时宜选用直径为３mm的拭子,避免因拭子取样给禽类造成 损伤. ５􀆰３　组织样品采集 ５􀆰３􀆰１　应用无菌器械无菌采集禽鸟的气管、肺、肝、脾、肾、脑、心、肠(包括内容物)等组织脏器,装入无菌 采样袋或其他灭菌容器中.上述每个样品取样重量为１５g~２０g,如果重量不够可取全部脏器(如脾脏). ５􀆰３􀆰２　不同禽鸟脏器不应混样,同一禽鸟的不同脏器一般不做混样. ５􀆰３􀆰３　将样品封口,注明组织名称,编号并填写相应采样单. ５􀆰４　粪便样品采集 小珍禽和野禽可采集新鲜粪便样品(每份样品１g~２g),分别置于盛有样品保存液的采样管中.粪 便样品的样品保存液中抗生素浓度应提高１０倍(按附录A). ５􀆰５　血清样品采集 ２NY/T７６５—２０２５ ５􀆰５􀆰１　禽翅静脉采血 可用不含抗凝剂的真空采血器或合适规格的注射器,压迫翅静脉近心端,使血管怒张,注射器针头平 行进入静脉,放松对近心端的按压,缓慢抽取血液,每只病禽采血样１mL,置于２mL离心管. ５􀆰５􀆰２　禽心脏采血 ５􀆰５􀆰２􀆰１　雏禽心脏采血 针头平行颈椎从胸腔前口插入,见有血液回流时,把针芯向外拉使血液流入采血器.每只病禽采血样 １mL,置于２mL离心管中. ５􀆰５􀆰２􀆰２　成年禽心脏采血 ５􀆰５􀆰２􀆰２􀆰１　右侧卧保定时,在触及心脏搏动明显处,或胸骨脊前端至背部下凹处连线的１/２处,垂直或稍 向前方刺入,见有血液回流即可采集.每只病禽采血样１mL,置于２mL离心管中. ５􀆰５􀆰２􀆰２􀆰２　仰卧保定时,胸骨朝上,压迫嗉囊,露出胸前口,将针头沿其锁骨俯角刺入,顺着体中线方向水 平刺入心脏,见有血液回流即可采集.每只病禽采血样１mL,置于２mL离心管中. ５􀆰５􀆰３　血清样品制备 将血样室温(２５℃)下倾斜３０°静置２h~４h,或３７℃温箱中静置３０min,待血液凝固、血清析出时,用 无菌针头剥离出血凝块,即可收集到血清.必要时,可低速离心(１０００g离心５min~１０min)分离出血 清,编号并填写相应采样单. ５􀆰６　整禽样品采集 将整个禽鸟尸体包入禽尸体袋中并编号,填写相应采样单.包装样品的容器密封后,外表需进行消毒 处理. ５􀆰７　环境样品采集 ５􀆰７􀆰１　包括可能被污染的器具、物品、地面、墙面等物体的表面进行样品采集时,采样拭子充分浸润样品 保