ICS 65.020.01 V 53 T/ZNZ 浙江省农产品质量安全学会团体标准 T/ZNZ 024—2020 水稻对穗腐病抗性鉴定技术 规程 Code of practice for evaluation of rice r esistance to spikelet rot disease caused by Fusarium proliferatum 2020-05-15发布 2020-06-15实施 浙江省 农产品质量安全学会 发布 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 024 -2020 I 前 言 本标准按照 GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由浙江省农产品质量安全学会提出并归口。 本标准起草单位： 中国水稻研究所 。 本标准主要起草人： 王玲、黄世文、刘连盟。 本标准为首次发布。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 024 -2020 1 水稻对穗腐病抗性鉴定技术规 程 1 范围 本标准规定了水稻 品种、材料对水稻穗腐 病（Fusarium proliferatu m）抗性的术语和定义、试剂 材料、设备、鉴定方法及评价标准 。 本标准适用于水稻 品种、材料对水稻穗腐病的抗性鉴定和抗性评价 。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。 凡是注日期的引用文件， 仅注日期的版本适用于本文件。 凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB 4404.1 粮食作物种子 第1部分 禾谷类 GB 5084 农田灌溉水质标准 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 8321 （所有部分）农药合理使用准则 GB 15618 土壤环境质量标 准 NY/T 496 肥料合理使用准则 通则 NY/T 1105 肥料合理使用准则 氮肥 NY/T 1276 -2007 农药安全使用规范 总则 3 术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 水稻穗腐病 rice spikelet rot disease 水稻穗腐病由层出镰刀菌（ Fusarium proliferatum ）为主要致病菌，侵染稻穗后引起的水稻穗部 枯死症状的真菌 病害。水稻穗腐病发生在抽穗扬花期，病害初期上部小穗颖壳尖端或侧面产生椭圆形小 斑点，后逐渐扩大至谷粒大部或全部。染病谷粒初期为红褐色或铁锈色， 后逐渐变成黄褐色或褐色，水 稻成熟时变成黑褐色，局部病穗伴有灰白色霉层。 3.2 分离物 isolate 从发病部位通过人工培养、纯化、再接种和分离等方法获得的病原菌培养物。 3.3 致病力 pathogenicity 病原物所具有的破坏寄主和引起病变的能力。 3.4 剑叶叶枕距 flag leaf pulvinus interval 水稻剑叶从倒二叶的叶鞘中抽出后，剑叶叶枕与倒二叶叶枕之间的距离 。剑叶叶枕高于倒二叶叶枕 时，为正叶枕距；剑叶叶枕低于倒二叶叶枕时，为负叶枕距。 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 024 -2020 2 4 试剂与材料 本标准所用试剂在未加说明时均采用分析纯试 剂。 实验室用水应符合 GB/T 6682 中规定的三级水要 求。 4.1 PDA培养基 马铃薯 200 g，洗净去皮切碎，加 水煮沸 20 min，纱布过滤，加入葡萄糖 20 g和琼脂 20 g，用水定 容至 1000 mL，搅拌均匀，高压灭菌（ 121℃，20 min）。 4.2 YEPD培养基 酵母提取物 5 g，蛋白胨 10 g，葡萄糖 20 g，用水定容至 1000 mL，搅拌均匀，高压灭菌（ 121℃， 20 min）。 5 仪器设备 5.1 超净工作台 5.2 高压灭菌锅 5.3 恒温培养箱 5.4 振荡摇床 5.5 光学显微镜 5.6 电子天平 5.7 医用注射器 6 接种体制备 6.1 病原菌分离与鉴定 从发病稻穗上切取病组织，用常规组织分离法获得分离物。分 离物的鉴定应符合附录 A的规定。 确认为层出镰刀菌后，采用单孢分离法进行病原菌菌株纯化，经科赫法则（ Koch’ s postulates ）验证后， 保存备用。 6.2 病原菌保存 将层出镰刀菌菌株接种于 PDA斜面培养基上， 28℃下培养 7 d，置 4℃冰箱内保存；或在斜面上加 一层灭菌矿物油（超过斜面顶部 1 cm）后，置于冰箱或室温保存。 6.3 接种体选择 根据试验需要选取 附录C的鉴别菌株或当地致病力强的菌株 作为接种体 。 6.4 接种体准备 将接种菌株转接于 PDA平板培养基上 ，置于恒温培养箱 28℃培养 3 d后，自菌落边缘切取菌饼， 接种于 100 mL的YEPD培养基， 在振荡摇床中 180 rpm、28℃培养 3 d，过滤菌丝，用灭菌的三级水配 成浓度为 5×105个/mL的分生孢子悬浮液，作为 接种体以备用 。 7 水稻穗腐病抗性 鉴定 7.1 鉴定病圃 7.1.1 鉴定圃选择 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 024 -2020 3 鉴定圃应设置在水稻穗腐病适发区。 土壤肥力水平中等偏上 ，肥力均匀 ，排灌方便，地势平坦较低 洼，具备良好的自然发病条件 。土壤环境质量应符合 GB 15618 中的二级标准 ，田间灌溉用水水质应符 合GB 5 084的规定。 7.1.2 田间管理 肥料施用应符合 NY/T 496 的规定。农药使用应符合 GB/T 8321 、NY/T 1276 -2007的规定。按当地 大田生产习惯对虫、草害进行防治，应及时采取有效的防护措施防治鼠、鸟、畜、禽等对试验的为害。 鉴定材料在全生育期内不使用杀菌剂，接种前后避免施用任何药剂。 7.2 鉴定材料 的种植 7.2.1 种子质量 鉴定材料种子质量 应符合 GB 4404.1 常规稻或杂交稻一级 种标准，不应带检疫性病虫。 7.2.2 种植要求 鉴定材料播种时间与大田生产播种时间相同或适当调整， 以使植株接种期和发病期能够与适宜水稻 穗腐病发生流 行的气候条件（ 温度： 25℃ ~ 33℃，相对湿度： 70 %以上）相遇 ，保证鉴定结果的准确 性。鉴定材料经浸种催芽后， 播于田间秧板上，湿润育苗。待 秧龄 25 d ~ 30 d进行移栽 。同一组试验同 期移栽，移栽后应及早进行查苗补缺。 7.2.3 鉴定设计 鉴定材料随机排列或顺序排 列。每份鉴定材料 重复 3次，每一重复栽植 5行，每行 6株。每50份 鉴定材料设附录 B中已知抗病和感病对照材料，或设当地种植的抗病品种和感病品种作为对照 。 7.2.4 保护行设置 在鉴定材料 四周种植不少于 2行的保护行品种 ，株行距与 鉴定材料 相同。保护行品种 应选择相对抗 病的对照品种。 7.3 接种 7.3.1 接种时期 接种时期为水稻剑叶叶 枕距 2 cm ~ 8 cm（该时期为幼穗发育的花粉内容充实期） ，接种时间选择在 傍晚进行。 7.3.2 接种方法 接种采用穗苞注射法。 将调好浓度的菌株分生孢子悬浮液注入稻穗苞中部，直至穗苞中充满菌液， 并从穗尖溢出为宜。每份鉴 定材料重复 3次，每重复接种 10株，每株 1穗，并保证接种稻 穗的生育进 程基本一致。 7.3.3 接种前后的田间管理 接种前后使田间保持 正常栽培稻的水层，接种后若遇持续高温干旱，应及时进行田间灌溉，保证病 害发生所需条件的满足 。 7.4 病情调查 7.4.1 调查时间 全国团体标准信息平台 T/ZNZ 024 -2020 4 在水稻进入腊熟期进行调 查。 7.4.2 调查与记载 观测鉴定材料的发病情况，根据病害症状描述，逐份材料进行调查，记载每个接种稻穗全部谷粒的 病情严重度，原始数据 记载采用附录 D的表 D.1。 7.4.3 病情级别划分 依据鉴定材料稻穗上谷粒的发病程度， 进行病情严重度分级， 病情级别及其对应的症状描述见表 1。 表1水稻穗腐病病情级别划分 病情级别 症状描述 0 谷粒子上无病斑 1 谷粒上有零星病斑，发病面积占谷粒面积的 0.1% ~ 10.0% 3 谷粒上有少量病斑，发病面积占谷粒面积的 10.1% ~ 25.0% 5 谷粒上有大量病斑，发病面积占谷粒面积的 25.1% ~ 50.0% 7 谷粒上病斑相连，发病面积占谷粒面积的 50.1% ~ 75.0% 9 谷粒上基本为病斑覆盖，发病面积占谷粒面积的＞ 75.1% 7.5 病情指数计算 根据病情症状描述，按照公式（ 1）计算每穗病情指数（ DI）。 ()100Bi BdDIM Md ………………………………………………… （1） 式中： DI — 病情指数； Bi — 各级谷粒数； Bd — 病情级别； M — 调查总谷粒数； Md — 严重度最高病情级别。 7.6 抗病性评价 7.6.1 抗病性评价标准 依据鉴定材 料3次重复的病情指数（ DI）平均值确定其对水稻穗腐病的抗性水平，划分标 准见表 2。 表2水稻穗腐病抗性评价标准 病情指数（ DI） 抗性评价 0.0 ≤ DI ≤ 10.0 高抗 Hi