SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4015--2013 出口动物源性食品中柱晶白霉素残留量 检测方法液相色谱-质谱/质谱法 Determination of leucomycin residue in foodstuffs of animal origin forexport--LC/MS/MSmethod 2013-11-06发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 玉家质量监督检验检疫总局 中华人民共和国出人境检验检疫 行业标准 出口动物源性食品中柱晶白霉素残留量 检测方法液相色谱-质谱/质谱法 SN/T4015—2013 * 中国标准出版社出版 北京市朝阳区和平里西街甲2号(100029) 北京市西城区三里河北街16号（100045) 总编室：(010)68533533 网址www.spc.net.cn 中国标准出版社秦皇岛印刷厂印刷 * 开本880×1230 1/16 印张1.25 字数32千字 2014年12月第一版 2014年12月第一次印刷 印数11300 * 书号：155066·2-28100 定价21.00 元 SN/T 4015—2013 前言 本标准按照GB/T1.12009给出的规则起草， 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国湖南出入境检验检疫局、中华人民共和国黄浦出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：张帆、蔡婧怡、王昕、丁利、颜鸿飞、王美玲、张莹。 H SN/T 4015-2013 出口动物源性食品中柱晶白素残留量 检测方法液相色谱-质谱/质谱法 1范围 本标准规定了动物源性食品中柱晶白霉素残留量的液相色谱-质谱/质谱测定和确证方法。 本标准适用于猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、鱼肉、牛奶等动物源性食品中柱晶自霉素残留的测定和确证。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中的柱晶白霉素用乙睛超声提取，加水定容，经正已烷去脂净化后，用液相色谱-质谱/质谱仪 检测和确证，外标法定量。 4试剂和材料 除另有说明外，所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一 级水 4.12 乙腈：液相色谱级。 4.2 正已烷：液相色谱级。 4.3甲醇：液相色谱级。 4.4乙酸铵。 4.5标准物质：柱晶白霉素（LeucomycinA1,CoH.NOCAS：1392-21-8），纯度大于或等于95.5%。 4.6标准储备溶液：准确称量适量（精确到0.1mg)的柱晶白霉素标准品于棕色容量瓶中，用水溶解并 定容，配制成终浓度1000mg/L的标准储备溶液，于4℃以下避光存放。 4.7标准中间溶液：准确吸取1.0mL标准储备溶液（4.6）于100mL容量瓶中，用水稀释并定容至 100mL，摇匀，配制成10μg/mL标准中间溶液，于4℃以下避光保存。 4.8基质标准工作溶液：根据需要吸取一定量的标准中间溶液（4.7)用基质空白溶液配制浓度分别为 0.005mg/L、0.01mg/L、0.02mg/L0.05mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L、0.5mg/L的基质标准工作溶液。 该标准工作溶液需现配现用。 5仪器与设备 5.1液相色谱串联四极杆质谱仪：配电喷雾离子源（ESI+）。 5.2分析天平：感量0.1mg和0.01g。 5.3旋涡混合器。 1 SN/T4015—2013 5.4离心机：8000r/min。 5.5组织捣碎机。 5.6 超声波仪。 5.7微孔滤膜：0.45μm。 6样品制备与保存 6.1制样要求 制样操作过程中应防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。 6.2 2猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、鱼肉 从所取全部样品中取出有代表性样品可食部分约500g，用组织捣碎机充分捣碎均匀，均分成两份， 分别装人洁净容器中，密封，并标明标记，于一18℃以下冷冻存放。 6.3牛奶 从所取全部样品中取出有代表性样品约500g，充分混匀，均分成两份，分别装入洁净容器中，密封， 并标明标记，于4℃以下保存。 7测定步骤 7.1 提取与净化 7.1.1猪肉、猪肝、猪肾、牛肉、鱼肉 称取1g试样（精确到0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人4mL乙腈（4.1)，于振荡器上涡 旋混匀2min，超声提取10min后，以7500r/min离心5min，取上清液于另一20mL刻度离心管中。 残渣再用2mL乙腈（4.1），重复上述操作，合并两次提取液，加水定容至10mL，混匀。然后加入4mL 正已烷（4.2），涡旋混匀2min，以5000r/min离心3min，弃去正已烷层。取1mL乙水提取液，过 0.45μm滤膜，供液相色谱串联四极杆质谱仪测定。 7.1.2牛奶 称取1g试样（精确到0.01g），置于50mL聚丙烯离心管中，加人4mL乙腊（4.1），涡旋混匀，超声 提取10min后，以7500r/min离心5min，取上清液于另一20mL刻度离心管中。残渣再用2mL乙 腈（4.1），重复上述操作，合并两次提取液，加水定容至10mL，混匀。然后加人4mL正已烷（4.2），涡旋 混匀2min，以5000r/min离心3min，弃去正已烷层。取1mL乙腈水提取液，过0.45μm滤膜，供液 相色谱串联四极杆质谱仪测定。 7.2测定 7.2.1液相色谱条件 液相色谱条件如下： a) 色谱柱：Cl8柱，3.5μm，150mm×3.0mm（内径），或相当者； b) 流动相：甲醇-5mmo1/L乙酸铵水溶液，梯度洗脱程序见表1； c) 流速：350μL/min； 2 SN/T4015-2013 (P 柱温：35℃； e) 进样量：10μL。 表1 液相色谱的梯度洗脱程序表 想由 时间 5mmol/L乙酸胺溶液 min % % 0.00 25 75 4.00 70 30 10.00 70 30 10.01 25 75 15.00 25 75 7.2.2 质谱条件 质谱条件如下： a) 离子化模式：电喷雾电离正离子模式（ESI+）； b) 质谱扫描方式：多反应监测（MRM)； 分辨率：单位分辨率； c) d) 其他参考质谱条件参见附录A。 7.2.3 定性测定 被测组分选择1个母离子、2个以上子离子，在相同实验条件下，如果样品中待检测物质与基质标 准溶液中对应的保留时间偏差在士2.5%之内，且样品谱图中各组分定性离子的相对丰度与浓度接近的 标准溶液谱图中对应的定性离子的相对丰度进行比较，相对丰度偏差不超过表2所规定的范围，则可判 断样品中存在相应的被测物。 表2 定性时相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 允许的相对偏差 % % >50 ±20 >20~50 ±25 >10~20 ±30 ≤10 ±50 7.2.4 定量测定 根据样液中被测化合物的含量情况，选定浓度接近的标准工作溶液进行分析。按浓度由小到大的 顺序依次分析基质标准工作溶液，得到基质标准工作溶液浓度与峰面积的工作曲线。基质标准工作溶 液和样液中待测化合物的响应值均应在仪器的检测线性范围内。对基质标准工作溶液和样液等体积参 差进样测定，在上述色谱条件下柱晶白霉素的参考保留时间为5.95min；标准品色谱图参见附录B中 图 B.1。 3