ICS 65.160 YC X 85 备案号：36924—2012 中华人民共和国烟草行业标准 YC/T441—2012 烟用添加剂禁用成分 硫脲的测定 高效液相色谱法 Determination of thiourea in tobacco additives- High performance liquid chromatographic method 2012-07-10发布 2012-08-01实施 国家烟草专卖局 发布 YC/T 441—2012 前言 本标准按照GB/T1.1—2009和GB/T20001.4-2001给出的规则起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会烟用材料分技术委员会（SAC/TC144/SC8)归口。 本标准起草单位：云南烟草科学研究院、湖南中烟工业有限责任公司。 本标准主要起草人：张承明、度苏行、陈永宽、杨华武、缪明明、谭建林、李劲竹、孙文梁、朱丽、者为、 李雪梅、王璐、贺兵。 YC/T441—2012 烟用添加剂禁用成分硫脲的测定 高效液相色谱法 1范围 本标准规定了烟用添加剂（香精和料液）中硫脲的测定方法一高效液相色谱法。 本标准适用于烟用添加剂（香精和料液）中硫脲的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件；凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单)适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 YC/T145.10烟用香精抽样 3原理 烟用添加剂（香精和料液)试样采用溶剂振荡萃取，用甲醇调节试样的溶剂环境后，经高效液相色谱 仪分离，以紫外检测器测定，外标法定量。 4试剂与材料 4.1水，符合GB/T6682中一级水的要求。 4.2乙，色谱纯。 4.3甲醇，色谱纯。 4.4二氯甲烷，分析纯。 4.5硫腺，CHN2S(CAS号：62-56-6)，纯度≥99%。 4.6稀释溶剂，甲醇/水混合溶剂，体积比7：3 4.7标准溶液。 4.7.1一级标准储备液 称取0.1g（精确至0.0001g）硫脲（4.5），用甲醇（4.3)溶解并移人100mL容量瓶中，用甲醇（4.3） 定容至刻度并摇匀。在4℃下密闭保存，有效期1个月。 4.7.2二级标准储备液 准确移取5.00mL级标准储备液（4.7.1)至100mL容量瓶中，用甲醇（4.3)稀释定容至刻度并 摇匀。在4℃条件下密闭保存，有效期1个月。 4.7.3标准工作溶液 分别准确移取0.10mL、0.30mL、0.50mL、1.00mL、2.00mL、4.00mL二级标准储备液（4.7.2） 至50mL容量瓶中，用稀释溶剂（4.6)定容至刻度，得到系列标准工作溶液。即配即用。 YC/T441—2012 5仪器设备 5.1高效液相色谱仪，配置柱温箱和紫外检测器，具备梯度洗脱功能。 5.2分析天平，感量0.1mg。 5.3振荡器，最大转速应不小于200r/min。 5.4离心机，最大转速应不小于6000r/min。 5.5有机相滤膜，0.45μm。 5.6常用实验仪器。 6抽样 按照YC/T145.10的规定抽取样品。 7分析步骤 7.1试样处理 称取1g（精确至0.0001g）试样于50mL具塞锥形瓶中，加人15mL水（4.1)，在150r/min条件 下振荡萃取10min，将振荡萃取液移入25mL具塞容量瓶中，用5mL水（4.1)分三次清洗锥形瓶，将 清洗溶液注人容量瓶中，并用水（4.1)定容至刻度，摇匀。移取10mL定容萃取液于10mL具塞离心试 管中，在5000r/min条件下离心10min，准确移取3mL上清液至10mL容量瓶中，用甲醇（4.3）定 容，摇匀。取适量溶液过0.45μm滤膜（5.5），滤液用高效液相色谱仪分析。 对于水不能溶解的试样，按照以下方法处理：称取1g(精确至0.0001g)试样于50mL具塞锥形瓶 中，加人5mL二氟甲烷（4.4)将试样分散均匀，再准确加人25mL水（4.1），在150r/min条件下振荡 萃取10min，静置分层，准确移取3mL上层水萃取溶液至10mL容量瓶中，用甲醇（4.3)定容，摇匀。 取适量溶液过0.45μm滤膜（5.5），滤液用高效液相色谱仪分析。 若待测试样溶液的浓度超出标准工作曲线浓度范围，则对试样前处理适当调整后重新测定。 7.2高效液相色谱条件 以下分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性。 —色谱柱：乙酰氨基键合硅胶填料，规格：填料粒径3.5μm，250mm（长度）×4.6mm（内径）； 流动相A：乙睛； 流动相B：水； —柱温：35℃； 一流速：0.7mL/min; 进样量：10μL； 一梯度洗脱程序见表1； 紫外检测器检测波长：247nm。 2 YC/T4412012 表1梯度洗脱程序 时间 流动相A 流动相B % % min 0 97 3 12 87 13 13 70 30 70 23 30 24 97 3 34 26 3 7.3标准工作曲线制作 按照色谱条件（7.2)测定标准工作溶液（4.7.3），以硫腺浓度与响应峰面积绘制标准工作曲线，工作 曲线线性相关系数R²≥0.999。 标准工作溶液色谱图参见附录A中图A.1。 每20次进样后加人一个中等浓度的标准工作溶液进行测定，如果测得值与原值的相对偏差超过 5%，则应重新进行标准工作曲线的制作。 7.4试样测定 按照色谱条件(7.2)测定试样（7.1)，每个试样平行测定两次。 典型加标试样色谱图示例参见附录A中图A.2。 8结果的计算与表述 烟用添加剂试样中硫脲含量按式(1)计算： (1 ) m 式中： x 试样中硫含量，单位为毫克每干克（mg/kg）； 标准工作曲线计算所得硫脲的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； C: 标准工作曲线计算所得空白样品中硫脲的浓度，单位为微克每毫升（μg/mL）； V -萃取液体积（V=25），单位为毫升（mL）； f——稀释系数(f=10/3)； 试样质量，单位为克（g）。 m 取两次平行测定结果的算术平均值作为试样测定结果，精确至0.01mg/kg。 两次平行测定结果的相对平均偏差应不大于10%。 9回收率、检出限和定量限 本方法的回收率、检出限和定量限结果见表2。 3 YC/T 4412012 表 2 方法的回收率、检出限和定量限结果 回收率 检出限 定量限 化合物 % mg/kg mg/kg 硫脲 90.85~94.78 0. 43 1. 42 10 试验报告 试验报告应说明： 识别被测试样需要的所有信息； 参照本标准所使用的试验方法； 测定结果，包括各单次测定结果及其平均值； 与本标准规定的分析步骤的差异； 在测定中观察到的异常现象； 试验日期； 试验人员。 YC/T441—2012 附录A （资料性附录） 色谱图示例 A.1标准工作溶液色谱图 标准工作溶液色谱图如图A.1所示。 mAU 3 2. 5 2 1. 5 1 0. 5 -0. 51 10 12 14 16 18 min 0 1—硫脲。 图A.1 标准工作溶液色谱图 A.2 典型加标试样色谱图 典型加标试样色谱图如图A.2所示。 mAU 3于 2. 5 1. 5 1 0. 5 0 0.5+ 10 12 14 16 18 min 硫脲。 图A.2 典型加标试样色谱图