ICS 65.160 YC X 87 备案号：37237—2012 中华人民共和国烟草行业标准 YC/T 447—2012 烟草及烟草制品 麦芽糖、蔗糖、 葡萄糖、果糖的测定 高效液相色谱 蒸发光检测器法 Tobacco and tobacco products--Determination of maltose,sucrose,glucose fructoseHigh performance liquid chromatography-evaporative light scattering detection method 2012-09-15实施 2012-08-22发布 国家烟草专卖局 发布 YC/T 447—2012 前 言 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准按照GB/T1.1--2009和GB/T20001.4—2001给出的规则起草。 本标准由国家烟草专卖局提出。 本标准由全国烟草标准化技术委员会卷烟分技术委员会（SAC/TC144/SC1)归口。 本标准起草单位：陕西中烟工业有限责任公司、郑州烟草研究院、湖南中烟工业有限责任公司、浙江 中烟工业有限责任公司、红云红河烟草（集团)有限责任公司、江西中烟工业有限责任公司、河北中烟工 业有限责任公司。 本标准主要起草人：彭军仓、何育萍、杨芳、樊亚玲、雷东锋、唐纲岭、戴云辉、周国俊、王明锋、廖垫、 张艳芳、李中皓、胡念念、袁凯龙、蒋举兴、郭磊、樊海燕、陈伟华。 建筑321---标准查询下载网 www. jz321. net YC/T447—2012 烟草及烟草制品麦芽糖、蔗糖、 葡萄糖、果糖的测定高效液相色谱- 蒸发光检测器法 1范围 本标准规定了烟草及烟草制品中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的高效液相色谱蒸发光散射的测定 方法。 本标准适用于烟草及烟草制品中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的测定。 本方法测定烟草及烟草制品中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖含量的检出限分别为0.018%、0.012%、 0.015%和0.021%，定量限分别为0.057%、0.042%、0.048%和0.069%。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件，凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 YC/T31烟草及烟草制品试样的制备和水分测定烘箱法 3原理 样品经0.02mol/L氢氧化钠溶液萃取后，采用高效液相色谱蒸发光检测器法测定萃取液中的麦芽 糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的浓度，并转换为样品中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的含量。 4 试剂与材料 除特别要求以外，试剂纯度均应使用分析纯及以上试剂，水应符合GB/T6682中一级水的规定。 4.1果糖（色谱纯），使用前需在(96士2)℃下干燥2h。 4.2葡萄糖（色谱纯），使用前需在（96±2)℃下干燥2h。 4.3蔗糖（色谱纯），使用前需在（96士2)℃下干燥2h。 4.4麦芽糖（色谱纯），使用前需在（96土2)℃下干燥2h。 4.5乙腈（色谱纯）。 4.6萃取溶液：0.02mol/L氢氧化钠溶液。 将0.8g片状氢氧化钠加人到800mL水中，搅拌溶解，放置冷却后用水稀释至1L。 4.7氮气（纯度≥99.9%）。 4.8标准溶液 4.8.1混合标准储备液 分别称取果糖(4.1)0.4g、葡萄糖（4.2)0.4g、蔗糖（4.3)0.2g、麦芽糖（4.4)0.09g，精确至 0.0001g，加水溶解后转移至100mL容量瓶中，用水定容至刻度，配制成果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖 1 YC/T447—2012 浓度分别为4000μg/mL、4000μg/mL、2000μg/mL和900μg/mL的混合标准储备液。密封保存于 0℃～4℃条件下，有效期1个月。 4.8.2混合标准工作溶液 围应覆盖检测样品浓度。该混合标准工作液应在使用前配制，参考的浓度见表1。 表1混合标准工作溶液 单位为微克每毫升 序号 果糖 葡萄糖 蔗糖 麦芽糖 1 125 125 63 28 250 250 125 57 3 500 500 250 113 4 1 000 1 000 500 225 5 2000 2 000 1 000 450 6 4 000 4 000 2 000 900 5仪器及条件 5.1 旋风式样品磨粉机。 5.2分析天平，感量为0.0001g。 5.3定性滤纸，$12.5cm。 5.40.22μm水相滤膜。 5.5振荡器。 5.6高效液相色谱仪，配自动进样器、柱温箱、蒸发光检测器（ELSD)。 以下色谱分析条件可供参考，采用其他条件应验证其适用性： 色谱柱：聚苯乙烯-二乙烯苯共聚物基质的键合氨基柱，内径：4.6mm，柱长1250mm，填料粒 度为5μm； 1 流动相：水：乙腈（4.5）（体积比为28：72）； 流速：0.8mL/min； 1 柱温：20℃； 进样量：10μL； 检测时间：20min。 ELSD参数： 氮气（4.7)流量：2.2L/min； 漂移管温度：50℃； -增益：1。 6分析步骤 6. 1 试样制备 按YC/T31制备试样并测定其水分含量。 2 建筑321---标准查询下载网 www. jz321. net YC/T447—2012 6.2萃取 称取约1g试样（白肋烟称样量为2g），精确至0.0001g，置于100mL具塞三角瓶中，准确加入 30mL萃取溶液（4.6），以180r/min振荡40min，定性滤纸（5.3)过滤，取2mL滤液，经0.22μm水相 滤膜(5.4)过滤后待分析。 6.3标准工作曲线的制作 对混合标准工作溶液（4.8.2)进行色谱测定，由保留时间定性，外标法定量。根据混合标准工作溶 液各组分浓度的对数以及对应组分的响应峰面积的对数，建立线性回归方程，相关系数R²应不小于 0.999。 6.4样品测定 按照仪器测试条件（5.6)测定试样（6.2）。混合标准工作溶液和样品溶液色谱图参见附录A。 结果的计算与表述 7 样品中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖和果糖的含量按式(1)计算： CXV X = (1) 式中： 一样品中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的含量，用质量分数（%）表示； 样品溶液中麦芽糖、蔗糖、葡萄糖、果糖的测定浓度，单位为微克每毫升（μg/mL)； V—-萃取液的体积，单位为毫升mL)； m一一样品的质量，单位为克（g）； 一样品水分的质量分数。 w- 结果以两次平行测定值的算术平均值表示，精确至0.01%。两次平行测定结果的相对平均偏差应 不大于5.0%。 8精密度和回收率 8.1精密度 对高、中、低含量的试样A、B、C，分别进行日间和日内精密度实验，本方法的精密度见表2。 表2方法的精密度 含量 日内精密度 日间精密度 试样 组 分 % RSD%(n=6) RSD%(n=5) 麦芽糖 0. 31 1. 63 2. 74 蔗糖 2. 87 1. 04 1. 93 A 葡萄糖 5. 86 0. 94 0. 82 果糖 8. 01 0. 31 80 3 YC/T447—2012 表2（续） 含量 日内精密度 日间精密度 试样 组 分 % RSD%(n=6) RSD%(n=5) 麦芽糖 0. 34 0.12 1. 82 蔗糖 0. 48 0.29 1. 42 B 葡萄糖 2. 71 0. 13 0. 87 果糖 5. 02 0.12 0. 79 麦芽糖 蔗糖 C 葡萄糖 1. 34 1. 81 2.72 果糖 2. 41 1. 98 2. 45 注：“二”表示未检出。 8.2 回收率 对高、中、低含量的试样A、B、C,分别添加高、中、低三个浓度水平的标准物质，本方法的回收率见表3。 表3方法的回收率 低浓度水平加标 中浓度水平加标 高浓度水平加标 原值/ 试样 组分 回收率/ 加标量/ 测定值/ 回收率/ 加标量/ 测定值/ 回收率/ 加标量/ 测定值/ mg % mg % % mg mg mg mg mg 麦芽糖 3.13 1.78 4, 96 103 2.77 5.83 97 3.96 7.32 106 蔗糖 28.72 18.91 46.97 97 .35.64 64,26 100 53.96 82.89 100 A 葡萄糖 58.44 30.09 89.71 104 57.92 116.33 100 86.96 143.34 86 果糖 80.11 40. 39 120.55 100 79.50 158.20 98 118.60 203.82 104 麦芽糖 3.37 2.18 5.71 107 4.52 8.14 106 6.63 10.15 102 燕糖 4,84 2.87 7. 66 98 4.62 9.51 101 7. 33 12.39 103 B 葡萄糖 26.98 13.57 40.92 103 26.35 54.02 103 40.53 68.34 102 果糖 48.08 19.01 68.05 105 37.13 84.99 66 56.92 103.48 97 麦芽糖 2.84 2. 91 102 蔗糖 4. 85 5.02 104 葡萄糖 13.28 4.19 17.39 98 8.48 22.17 105 13.94 27.48 102 果糖 24, 17 8. 91 33.23 102 16.34 40.27 66 25.51 49.24 98 注1：“--”表示未检出。 注2：“原值”为1.0g试样中所含的麦芽糖、蔗糖、葡萄糖和果