ICS65.120 CCSB46 中华人民共和国国家标准 GB/T19371—2025 代替GB/T19371.2—2007 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法 Determinationofmethioninehydroxyanalogueinfeeds— High-performanceliquidchromatography 2025-08-29发布 2026-03-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T19371.2—2007《饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法》。与 GB/T19371.2—2007相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: a) 适用范围增加了精料补充料和混合型饲料添加剂(见第1章); b) 更改了流动相为甲酸乙腈溶液(见5.4,2007年版的4.5); c) 更改了标准品的要求及相关规定(见5.8,2007年版的4.6); d) 增加了标准系列溶液要求(见5.9); e) 删除了采样,更改了样品制备(见第7章,2007年版的第6章); f) 删除了羟基蛋氨酸钙的计算公式(见2007年版的第8章); g) 更改了精密度要求(见第10章,2007年版的第9章)。 请注意本文件某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由全国饲料工业标准化技术委员会(SAC/TC76)提出并归口。 本文件起草单位:中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所、通威农业发展有限公司、陕西 秦云农产品检验检测股份有限公司、山东新和成氨基酸有限公司。 本文件主要起草人:索德成、樊霞、张凤枰、冯玉超、刘妩妍、卢加文、王建波、肖志明、张璐、伍宏凯、 贺习文、陈效儒、赵娟、汪军明。 本文件及其所代替文件的历次版本发布情况为: ———2004年首次发布为GB/T19371.2—2003,2007年第一次修订; ———本次为第二次修订。 ⅠGB/T19371—2025 饲料中蛋氨酸羟基类似物的测定 高效液相色谱法 1 范围 本文件描述了饲料中蛋氨酸羟基类似物的高效液相色谱测定方法。 本文件适用于配合饲料、浓缩饲料、精料补充料、添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂中蛋氨酸 羟基类似物和/或蛋氨酸羟基类似物钙盐(以蛋氨酸羟基类似物计)的测定。 本文件中配合饲料、浓缩饲料、精料补充料的定量限为0.03%,添加剂预混合饲料和混合型饲料添 加剂的定量限为0.1%。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 GB/T6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 原理 试样中蛋氨酸羟基类似物用乙腈溶液提取,氢氧化钾溶液水解,高效液相色谱测定,外标法定量。 5 试剂或材料 除非另有规定,仅使用分析纯试剂。 5.1 水:GB/T6682,一级水。 5.2 乙腈:色谱纯。 5.3 甲酸:色谱纯。 5.4 甲酸乙腈溶液:移取甲酸0.5mL、乙腈50mL,加入950mL水,混匀,超声脱气。 5.5 10%乙腈溶液:量取乙腈100mL、水900mL,混匀。 5.6 50%磷酸溶液:量取磷酸100mL、水100mL,混匀。 5.7 50%氢氧化钾溶液:称取氢氧化钾50g,加入100mL水溶解,混匀。 5.8 1mg/mL标准储备溶液(以蛋氨酸羟基类似物计):称取适量(精确至0.0001g)蛋氨酸羟基类似 物钙(CAS号:4857-44-7,纯度大于98%)标准品于100mL容量瓶中,用10%乙腈溶液(5.5)溶解、定 容,混匀;或称取适量(精确至0.0001g)蛋氨酸羟基类似物(CAS号:583-91-5,纯度大于88%),于 1GB/T19371—2025 100mL容量瓶中,用10%乙腈溶液(5.5)溶解、定容,混匀。-18℃以下保存,有效期6个月。或使用标 准物质。 注:若需要,采用GB7300.103测定蛋氨酸羟基类似物含量校正标准储备溶液。 5.9 标准系列溶液:分别准确移取适量标准储备溶液(5.8),用10%乙腈溶液(5.5)稀释、定容,混匀,配 制成质量浓度分别为5μg/mL、10μg/mL、20μg/mL、40μg/mL、80μg/mL的标准系列溶液。临用 现配。 5.10 微孔滤膜:0.45μm,有机系。 6 仪器设备 6.1 高效液相色谱仪:配有紫外检测器或二极管阵列检测器。 6.2 分析天平:精度为0.01g和0.0001g。 6.3 离心机:转速不低于8000r/min。 6.4 旋涡振荡器。 6.5 超声波清洗器。 6.6 往返式振荡器。 7 样品 按GB/T20195制备样品,至少200g,粉碎使其全部通过0.425mm孔径的试验筛,充分混匀,装入 密闭容器中。 8 试验步骤 8.1 提取 8.1.1 配合饲料、浓缩饲料、精料补充料 平行做两份试验。称取试样5g(精确至0.0001g),置于150mL具塞三角瓶中,准确加入50mL 10%乙腈溶液(5.5),漩涡混合30s,置于振荡器上剧烈振荡30min,8000r/min离心5min。取上清液 备用。 8.1.2 添加剂预混合饲料和混合型饲料添加剂 平行做两份试验。称取试样2g(精确至0.0001g),置于150mL具塞三角瓶中,准确加入100mL 10%乙腈溶液(5.5),漩涡混合30s,置于振荡器上剧烈振荡30min,8000r/min离心5min。取上清液 备用。 8.2 水解 准确移取备用液(8.1)和标准系列溶液(5.9)5mL,分别置于10mL具塞试管中,准确加入0.1mL 50%氢氧化钾溶液(5.7),振摇至少10s,准确加入0.2mL50%磷酸溶液(5.6),振摇至少10s, 8000r/min离心5min,上清液过微孔滤膜(5.10),待测。 8.3 液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下: 2GB/T19371—2025 a) 色谱柱:C18,柱长250mm,内径4.6mm,粒径5.0μm,或性能相当者; b) 流动相:甲酸乙腈溶液(5.4); c) 流速:1.0mL/min; d) 检测波长:210nm; e) 柱温:30℃; f) 进样量:20μL。 8.4 测定 8.4.1 标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下,分别取标准系列工作溶液(8.2)和试样溶液(8.2)上机测定。蛋氨酸羟基类 似物标准溶液的液相色谱图见附录A。 8.4.2 定性 以保留时间定性,试样溶液中蛋氨酸羟基类似物的保留时间应与标准系列溶液(质量浓度相当)中 蛋氨酸羟基类似物的保留时间一致,其相对偏差在±2.5%之内。 8.4.3 定量 以标准系列溶液中蛋氨酸羟基类似物的质量浓度为横坐标,色谱峰面积为纵坐标,绘制标准曲 线,其相关系数应不低于0.99。试样溶液中待测物的质量浓度应在标准曲线的线性范围内。如超出范 围,应将备用液(8.1)用10%乙腈溶液(5.5)稀释、水解,重新测定。单点校准定量时,试样溶液中待测物 的质量浓度与标准溶液质量浓度相差不超过30%。 9 试验数据处理 试样中蛋氨酸羟基类似物含量以质量分数w计,数值以%表示。多点校准按公式(1)计算;单点校 准按公式(2)计算。 w=ρ×V×f×106 m×100 …………………………(1) 式中: ρ ———由标准曲线得到的试样溶液中蛋氨酸羟基类似物的质量浓度,单位为微克每毫升 (μg/mL); V ———试样提取溶液总体积,单位为毫升(mL); f ———超出线性范围后试样溶液的稀释倍数; m ———试样质量,单位为克(g)。 w=A×ρs×V×f×106 As×m×100…………………………(2) 式中: A ———蛋氨酸羟基类似物待测物色谱峰面积; ρs ———标准溶液中蛋氨酸羟基类似物的质量浓度,单位为微克每毫升(μg/mL); V ———试样提取溶液总体积,单位为毫升(mL); f ———试样溶液的稀释倍数; 3GB/T19371—2025 As ———标准溶液蛋氨酸羟基类似物色谱峰面积; m ———试样质量,单位为克(g)。 测定结果用平行测定的算术平均值表示,保留3位有效数字。 10 精密度 在重复性条件下,2次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的10%。 4GB/T19371—2025