ICS11.220 CCSB41 中华人民共和国国家标准 GB/T21674—2025 代替GB/T21674—2008,GB/T34745—2017,GB/T35901—2018,GB/T35910—2018 猪圆环病毒病诊断技术 Diagnostictechniquesforporcinecircovirusdisease 2025-08-29发布 2026-03-01实施 国家市场监督管理总局 国家标准化管理委员会发布目 次 前言 Ⅲ ………………………………………………………………………………………………………… 引言 Ⅳ ………………………………………………………………………………………………………… 1 范围 1 ……………………………………………………………………………………………………… 2 规范性引用文件 1 ………………………………………………………………………………………… 3 术语和定义 1 ……………………………………………………………………………………………… 4 缩略语 1 …………………………………………………………………………………………………… 5 临床诊断 2 ………………………………………………………………………………………………… 6 样品采集、保存与运输 3 …………………………………………………………………………………… 7 病毒分离与鉴定 3 ………………………………………………………………………………………… 8 聚合酶链式反应(PCR) 5 ………………………………………………………………………………… 9 实时荧光聚合酶链式反应(Real-timePCR) 7 …………………………………………………………… 10 间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA) 9 ……………………………………………………………… 11 阻断酶联免疫吸附试验(阻断ELISA) 10 ……………………………………………………………… 12 免疫组织化学试验(IHC) 11 …………………………………………………………………………… 13 综合判定 12 ……………………………………………………………………………………………… 附录A(规范性) 样品保存、病毒分离与鉴定相关溶液的配制 13 ……………………………………… 附录B(规范性) PCR、Real-timePCR相关溶液的配制 14 ……………………………………………… 附录C(资料性) PCR、Real-timePCR引物探针信息、扩增片段序列及检测结果参照图 15 ………… 附录D(规范性) ELISA相关试剂的制备 17 …………………………………………………………… 附录E(资料性) ELISA相关抗原与血清的制备 18 …………………………………………………… 附录F(规范性) IHC相关溶液的配制 22 ………………………………………………………………… ⅠGB/T21674—2025 前 言 本文件按照GB/T1.1—2020《标准化工作导则 第1部分:标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 本文件代替GB/T21674—2008《猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法》、GB/T34745—2017《猪圆环 病毒2型 病毒SYBRGreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法》、GB/T35901—2018《猪圆环病毒2型荧 光PCR检测方法》和GB/T35910—2018《猪圆环病毒2型阻断ELISA抗体检测方法》。本文件以 GB/T21674—2008为主,整合了GB/T34745—2017、GB/T35901—2018、GB/T35910—2018的内 容,与GB/T21674—2008相比,除结构调整和编辑性改动外,主要技术变化如下: ———更改了范围(见第1章,2008年版的第1章); ———删除了实验室生物安全要求(见2008年版的第2章); ———增加了缩略语(见第4章); ———增加了临床诊断(见第5章); ———更改了样品采集、保存与运输(见第6章,2008年版的4.1); ———增加了病毒分离与鉴定(见第7章); ———更改了聚合酶链式反应(PCR)(见第8章,2008年版的第3章、第4章、第5章); ———增加了实时荧光聚合酶链式反应(Real-timePCR)(见第9章); ———增加了间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)(见第10章); ———增加了阻断酶联免疫吸附试验(阻断ELISA)(见第11章); ———增加了免疫组织化学试验(IHC)(见第12章); ———增加了综合判定(见第13章); ———增加了样品保存、病毒分离与鉴定相关溶液的配制(见附录A); ———更改了PCR、Real-timePCR相关溶液的配制(见附录B,2008年版的附录A); ———增加了ELISA相关试剂的制备(见附录D); ———增加了IHC相关溶液的配制(见附录F)。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由中华人民共和国农业农村部提出。 本文件由全国动物卫生标准化技术委员会(SAC/TC181)归口。 本文件起草单位:中国动物卫生与流行病学中心、河南农业大学、中华人民共和国上海海关、南京农 业大学、湖南农业大学、湖南冠牧生物科技有限公司、娄底市动物疫病预防控制中心、上海市动物疫病预 防控制中心、河北农业大学、湖南派智生物科技有限公司。 本文件主要起草人:董雅琴、魏战勇、张强、白娟、崔进、魏荣、王乃东、赵和平、王先炜、房琳琳、杨毅、 马世杰、李健、姜平、杨忠苹、谭庆辉、杨德全、张颜、郑兰兰、袁万哲、周文锋、谢昊飞。 本文件所代替文件的历次版本发布情况为: ———GB/T21674—2008,2008年首次发布; ———GB/T34745—2017,2017年首次发布; ———GB/T35901—2018,2018年首次发布; ———GB/T35910—2018,2018年首次发布。 ⅢGB/T21674—2025 引 言 猪圆环病毒病(Porcinecircovirusdisease,PCVD),又称为猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus-associateddisease,PCVAD),是由猪圆环病毒2型(Porcinecircovirustype2,PCV2)感染猪 引起的一系列疾病的总称。PCVD有不同的临床表现,包括猪圆环病毒2型系统性疾病(PCV2sys- temicdisease,PCV2-SD)、猪圆环病毒2型繁殖性疾病(PCV2reproductivedisease,PCV2-RD)、猪皮炎 与肾病综合征(Porcinedermatitisandnephropathysyndrome,PDNS)及亚临床感染。过去称为断奶后 多系统衰竭综合征(Postweaningmultisystemicwastingsyndrome,PMWS)的疾病以及PCV2引起的 呼吸道和肠道相关疾病已被证明是PCV2-SD的一部分。PCV2属于圆环病毒科(Circoviridae)、圆环病 毒属(Circovirous)单股环状DNA病毒,感染猪后可导致免疫抑制,易与其他病毒或细菌引起混合感 染,造成猪只生长发育受阻,免疫系统受损等。PCV2与猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductiveandrespiratorysyndromevirus,PRRSV)、猪流感病毒(Swineinfluenzavirus,SIV)、副猪 格拉瑟菌、猪肺炎支原体等病原的共感染往往会诱发或促进PCVD的发生。PCVD在全球范围内广泛 流行,各日龄和品种的猪均可发生,其中仔猪和母猪受到的危害相对较重。该病因其发病率高、流行较 广、易引起免疫抑制等特点,给养猪业造成了较重的经济损失。在我国现行《一、二、三类动物疫病病种 名录》中,该病为三类动物疫病。 本文件诊断技术内容包括临床诊断、病原学诊断和血清学诊断,结合我国相关技术研究新成果 修订。 ⅣGB/T21674—2025 猪圆环病毒病诊断技术 1 范围 本文件描述了猪圆环病毒病(PCVD)的临床诊断、病毒分离与鉴定、聚合酶链式反应(PCR)、实时 荧光聚合酶链式反应(Real-timePCR)、间接酶联免疫吸附试验(间接ELISA)、阻断酶联免疫吸附试验 (阻断ELISA)、免疫组织化学试验(IHC)等方法。 本文件适用于PCVD的诊断、检疫、检测、监测和流行病学调查。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中,注日期的引用文 件,仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件,其最新版本(包括所有的修改单)适用于 本文件。 NY/T541 兽医诊断样品采集、保存与运输技术规范 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 缩略语 下列缩略语适用于本文件。 AEC:3-氨基-9-乙基咔唑(3-Amino-9-Ethylcarbazole) BSA:牛血清白蛋白(BovineSerumAlbumin) Ct:循环阈值(CycleThreshold) DAB:二氨基联苯胺(Diaminobenzidine) DAPI:4',6-二脒基-2-苯基吲哚(4',6-Diamidino-2-Phenylindole) DEPC:焦碳酸二乙酯(DiethyPyrocarbonate) DNA:脱氧核糖核酸(DeoxyribonucleicAcid) EDTA:乙二胺四乙酸(Ethylene