ICS 65.120 CCS B 46 团 体 标 准 饲料中4种解热镇痛类药物的测定 Determination of four antipyretic and analgesic drugs in feeds 2025-8-1发布 2025-9-1实施 中国饲料工业协会 发 布 T/CFIAS 6017—2025 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6017—2025 I 前言 本文件按照 GB/T 1.1 —2020《标准化工作导则 第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定 起草。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别专利的责任。 本文件由 中国饲料工业协会团体标准技术委员会提出并归口 。 本文件起草单位：上海市兽药饲料检测所、浙江省兽药饲料监察所、江苏省兽药饲料质量检验所、 安徽省兽药饲料监察所、中国农业科学院饲料研究所。 本文件主要起草人：徐汀、张婧、黄家莺、张浩然、黄士新、曹莹、华贤辉、商军、陶玉洁、严凤、 吴雨珊、张传亮、储瑞武、吴昊、谷旭、王彬、耿士伟、刘发全、贾铭、吴贇竑、郑胜兰、明文庆、王 杰、柴娟、贾书静、宋亚伟、张博、尹原妍、丁在亮、吴玲、束玲玲。 全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6017—2025 1 饲料中4种解热镇痛类药物的测定 1 范围 本文件描述了饲料中对乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林 4种解热镇痛类药物的高效液相 色谱和液相色谱 -串联质谱测定方法。 本文件中高效液相色谱法适用于混合型饲料添加剂、添加剂预混合饲料、浓缩饲料和配合饲料中对 乙酰氨基酚、安乃近、氨基比林、安替比林的测定；液相色谱 -串联质谱法适用于饲料和饲料添加剂中 对乙酰氨基酚、 4-甲氨基安替比林（安乃近标识物）、氨基比林、安替比林的测定。 本文件对乙酰氨基酚、 氨基比林、 安替比林的高效液相色谱法检出限为 5 mg/kg、 定量限为 25 mg/kg ， 安乃近检出限为 15 mg/kg 、定量限为 35 mg/kg ；本文件对乙酰氨基酚、 4-甲氨基安替比林、氨基比林、 安替比林的液相色谱 -串联质谱法的检出限为 25 μg/kg、定量限为 50 μg/kg。 2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。 其中， 注日期的引用文件， 仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本 文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 20195 动物饲料 试样的制备 3 术语和定义 本文件没有需要界定的术语和定义。 4 高效液相色谱法 4.1 原理 试样中的 待测物用甲醇提取，高效液相色谱仪测定，外标法定量。 4.2 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂 。 4.2.1 水：GB/T 6682 ，一级。 4.2.2 甲醇：色谱纯。 4.2.3 乙腈：色谱纯。 4.2.4 磷酸盐缓冲液：取磷酸氢二钠 3.0 g，加水1 000 mL ，用磷酸调 pH值至7.0，混匀。 4.2.5 标准储备溶液 （ 5 mg/mL）：根据纯度， 称 取对乙酰氨基酚标准品 （ CAS：103-90-2，纯度≥98%）、 安乃近标准品（ CAS：5907-38-0，纯度≥94.5%）、氨基比林标准品（ CAS：58-15-1，纯度≥98%）、安 替比林标准品（ CAS：60-80-0，纯度≥98%）适量（精确至 0.1 mg），分别置于棕色容量瓶中，用甲醇 （4.2.2）溶解并 定容，混匀。于-18 ℃以下避光保存，有效期为 6个月。 4.2.6 混合标准中间溶液（ 250 μg/mL）：准确移取标准储备溶液（ 4.2.5）各5 mL于100 mL棕色容 量瓶中，用甲醇（ 4.2.2）稀释定容。于 2 ℃～8 ℃避光保存，有效期为 3个月。 4.2.7 混合标准系列溶液：分别准确移取适量 混合标准中间溶液（ 4.2.6）于棕色容量瓶中，用甲醇 （4.2.2）稀释定容 ，混匀， 配成待测物质量 浓度为0 μg/mL 、1 μg/mL 、2 μg/mL 、5 μg/mL 、10 μg/mL、50 μg/mL 的标准曲线系列溶液 。临用现配。 4.2.8 微孔滤膜： 0.22 μm ，有机系。 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6017—2025 2 4.3 仪器设备 4.3.1 高效液相色谱仪：配紫外检测器或二极管阵列检测器。 4.3.2 天平：精度为 0.01 g和0.1 mg。 4.3.3 振荡器：转速不低于 500 r/min 。 4.3.4 离心机：转速不低于 9000 r/min 。 4.3.5 涡旋混合器。 4.4 样品 按GB/T 20195 制备试样，不少于 200 g，粉碎使其全部通过 0.425 mm 孔径的分析筛，充分混匀，装 入棕色磨口瓶，备用。 4.5 试验步骤 4.5.1 提取 平行做两份试验。 称取试样 2 g（精确至 0.01 g） ， 于50 mL离心管中， 准确加入 25 mL甲醇 （4.2.2）， 涡旋1 min，振荡提取 20 min，9000 r/min 离心5 min，准确移取上清液 5 mL于10 mL棕色容量瓶中，用 甲醇定容，混匀，微孔滤膜（ 4.2.8）过滤，待测。 4.5.2 测定 4.5.2.1 高效液相色谱参考条件 液相色谱参考条件如下： a) 色谱柱： C18柱，柱长 250 mm，内径4.6 mm，粒径5.0 μm，或性能相当者； b) 柱温：40 ℃； c) 检测波长： 245 nm； d) 流速：1.0 mL/min ； e) 进样量： 20 μL。 f) 流动相： A相为磷酸盐缓冲液（ 4.2.4），B相为乙腈（ 4.2.3），梯度洗脱程序见表 1。 表1 梯度洗脱程序 时间 min A相 % B相 % 0.00 87 13 9.00 87 13 9.10 75 25 18.00 75 25 18.10 87 13 30.00 87 13 4.5.2.2 混合标准系列溶液和试样溶液测定 在仪器的最佳条件下，分别取混合标准系列溶液（ 4.2.7）和试样溶液（ 4.5.1）上机测定。混合标 准系列溶液中待测物的高效液相色谱图参见附录 A。 4.5.2.3 定性 在仪器的最佳条件下，试样溶液中待测物的保留时间应与混和标准系列溶液（质量浓度相当）中对 应药物的保留时间一致，其相对偏差在± 2.5%之内。 全国团体标准信息平台 T/CFIAS 6017—2025 3 4.5.2.4 定量 在相同试验条件下， 以混合标准系列工作溶液中待测物的质量浓度为横坐标， 色谱峰面积为纵坐标， 绘制标准曲线，其相关系数应不低于 0.99。试样溶液中待测物的质量浓度应在标准曲线的线性范围内。 如超出范围，应将试样溶液用甲醇稀释后，重新测定。单点校准定量时 ,试样溶液中待测物的质量浓度 与标准溶液质量浓度相差不超过 30%。 4.6 试验数据处理 试样中待测物的 含量wi以质量分 数计，数值以毫克每千克（ mg/kg）表示。多点校准按式（ 1）计算； 单点校准按式（ 2）计算： 𝑤𝑖=𝜌𝑖×𝑉1×𝑉3×1000 𝑉2×𝑚×1000×𝑓 ································ ································ ·· (1) 式中： 𝜌𝑖 ——由标准曲线得到的试样溶液解热镇痛类药物的质量浓度，单位为微克每毫升 （g/mL）； 𝑉1 ——试样中加入提取液体积，单位为毫升（ mL）； 𝑉3 ——试样中最终定容体积，单位为毫升（ mL）； 𝑓 ——超出线性范围后，试样溶液稀释倍数 ； 𝑉2 ——移取上清液的体积，单位为毫升（ mL）； 𝑚 ——试样质量，单位为克（ g）； 1000 ——换算系数 。 𝑤𝑖=𝐴×𝑉1×𝑉3×𝜌𝑠𝑖×1000 𝐴𝑠𝑖×𝑉2×𝑚×1000×𝑓 ································ ······························· (2) 式中： 𝐴 ——试样溶液 中待测物的 色谱峰面积 ； 𝑉1 ——试样中加入提取液体积，单位为毫升（ mL）； 𝑉3 ——试样中最终定容体积，单位为毫升（ mL）； 𝜌𝑠𝑖 ——待测物标 准工作溶液质量浓度，单位为微克每毫升（ g/mL）； 𝑓 ——超出线性范围后，试样溶液稀释倍数 ； 𝐴𝑠𝑖 ——标准溶液色谱峰面积； 𝑉2 ——移取上清液的体积，单位为毫升（ mL）； 𝑚 ——试样质量，单位为克（ g）； 1000 ——换算系数。 测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。 4.7 精密度 在重复性条件下，两次独立测定结果与其算术平均值的绝对差值不大于该算术平均值的 10%。 5 液相色谱 -串联质谱法 5.1 原理 试样中的待测物用甲醇提取，经混合型强阳离子固相萃取小柱净化，液相色谱 -串联质谱仪