SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 3715—2013 化妆品 体外发育毒性试验 大鼠全胚胎试验法 CosmeticsIn vitro test method for embryotoxicity- Rat whole embryo culture test 行业标准信息服务平台 2013-11-06 发布 2014-06-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T3715—2013 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出入境检验检疫局、上海国家新药安全评价中心、上海市质 量监督检验技术研究院。 标准主要起草人：李小林、杨捷琳、邱璐、蒋静、王艳、常艳、段文锋、林海霞、周耀斌、宁啸骏。 行业标准信息服务平台 SN/T3715—2013 化妆品体外发育毒性试验 大鼠全胚胎试验法 1范围 本标准规定了化妆品及化妆品成分发育毒性试验大鼠全胚胎试验方法。 本标准适用于化妆品及化妆品成分体外发育毒性检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB14925实验动物环境及设施 3术语和定义 下列术语和定义适用于本文件。 3.1 最大无效应浓度ICNOECTMIS 对形态学评分无影响的最大剂量。 3.2 最大抑制浓度 ICmax 4基本原理 植人后大鼠全胚胎培养法可用于评价受试物是否引起胚胎发育毒性从而导致胚胎畸形。本方法使 用的大鼠胚胎具有1～5个体节。通常情况下，这些胚胎与日龄更长的胚胎相比，其在心脏发育、神经管 闭合、耳和眼的发育、臂杆和肢芽等方面对外来化合物更为敏感。对该阶段的干预可能引起生长迟缓、 一个或多个器官原基的特定畸形。胚胎培养于旋转培养箱中有利于培养基与上方气相的气体交换。后 者随着胚胎对氧气的需要量不断增加，应对培养基充氧。对培养的胚胎的形态进行评价。通过将暴露 组的胚胎与对照组胚胎进行比较从而判断受试物是否具有胚胎毒性。 5试验准备 5.1实验动物 5.1.1大鼠品系 任何经过阳性和阴性对照化合物的质量检测且具有大量胚胎/仔鼠的大鼠品系均可用于本试验。 选用7～10周龄雌性大鼠，动物交配前适应2周。雄性大鼠至少10周龄以上。制备血清的大鼠体重至 1 SN/T3715—2013 少要250g。 5.1.2饲养条件 实验动物饲养条件应符合GB14925的要求。大鼠饲养于SPF级动物饲养室，环境温度为20℃~ 24℃，相对湿度50%～70%，自由摄食和饮水。每天通过动物一般行为观察动物健康状态。 5.2材料和设备 5.2.1 解剖显微镜。 5.2.2 无菌手术剪刀、镊子。 5.2.3 100mm培养皿。 5.2.4 37℃旋转培养装置及转瓶（10mL以上）。 5.2.5 多功能酶标仪。 5.2.6 二氧化碳培养箱。 5.2.7 真空采血管。 5.2.8 BALB/c小鼠成纤维细胞3T3。 5.2.9 试剂。 5.2.10 DMEM培养基。 5.2.11 Hanks平衡盐溶液。 5.2.12 MTT。 5.2.13 0.25%胰蛋白酶。 5.2.14 二甲基亚矾。 5.2.15 乙醇。 5.2.16 5-氟尿嘧啶。 行业标准信 5.2.17 青霉素G。 6试验步骤 6.1动物饲养 料，垫料，水等均无影响本试验结果的已知污染物。12h明暗交替照明，自由摄食、饮水。动物交配前 雌雄动物分笼饲养；交配后受孕按1～2只/笼饲养。 6.2血清准备 雄性大鼠经CO2麻醉后经腹位固定，打开腹腔，暴露主动脉，用真空采血管采血，采血1min后将 血液按1800rpm离心5min，收集血清并放于冰上。待所有血清收集完成后，将收集的血清再次以 1800rpm离心3min。将血清置于56℃灭活30min，然后置于一20℃保存，血清使用前37℃预热 6.3受试物准备 每个胚胎培养管加入2mL大鼠血清。受试物溶解于适当的溶剂，如HBSS,DMSO或甲醇，标准 体积的受试物溶液在放人动物胚胎之前加到动物血清中。相同体积的溶剂对照加入到对照组中，之前 的试验表明该体积的溶剂对照不会干扰胚胎的器官发育。溶剂的最大剂量为1%培养基（HBSS、水）， 0.125%DMSO和0.2%甲醇溶液。培养管经充气后加人胚胎。每组胚胎随机分配到不同剂量的实验 2