SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4181—2015 甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法 Detection and identification of Ramularia beticola 行业标准信息服务平台 2015-02-09发布 2015-09-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4181—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国黑龙江出人境检验检疫局。 本标准主要起草人：杨立群、张洪祥、刘忠梅、程阳、严进、刘洪义、孟玉芹、聂文革。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4181—2015 甜菜叶斑病菌检疫鉴定方法 1范围 本标准规定了甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定方法 本标准适用于甜菜种子、植株中甜菜叶斑病菌的检疫和鉴定。 2基本信息 中文名称：甜菜叶斑病菌 拉丁学名：RamulariabeticolaFautr.etLambotte 分类地位：真菌界（Fungi），子囊菌门（Ascomycota），座囊菌纲（Dothideomycetes），煤目（Capno diales），球腔菌科（Mycosphaerellaceae），柱隔孢属（Ramularia）。 传播途径：该病菌依靠风雨等近距离传播，以病株的组织尤其是叶片、种子远距离传播。 该病菌的其他信息参见附录A。 3方法原理 甜菜叶斑病菌具有分生孢子梗和分生孢子，其在寄主上危害的症状及形态特征是鉴定该病菌的主 要依据。 4仪器设备 4.1仪器 实体显微镜、生物显微镜、超净工作台、高压灭菌锅、光照恒温培养箱、电子天平（1/1000）、冰箱、振 荡器、离心机等。 4.2实验用具 三角瓶（250mL、500mL）、培养皿（9cm）、烧杯、剪刀、解剖针、解剖刀、滤纸、离心管、透明胶带、白 信息服 瓷盘等。 5 现场检查 检查种子中是否有可疑病粒（没有种衣剂的情况下）以及植物的病残体，并把可疑样品送到实验室 做进一步鉴定。 6实验室检验 6.1非种衣剂种子检验 6.1.1洗涤检验 取50g种子样品放入灭菌的三角瓶中，加人300mL无菌水，在振荡器中震荡5min~10min，然后 1 SN/T 4181—2015 将震荡液在1500r/min下离心5min，倒掉上清液留下1mL左右沉淀液，在显微镜下观察， 6.1.2保湿培养 将种子样品倒入灭菌磁盘中，检查病残体和可疑的病粒、瘾粒，然后用灭菌的镊子在无菌的情况下 将其放人已灭菌的、具三层滤纸的培养血中（直径9cm），加3mL的无菌水，每皿约35粒，放入10个培 养血。将培养皿封闭在透明塑料袋中或用透明胶条封口，在16℃～20℃条件下光暗交替培养5d后用 实体显微镜开始观察，也可肉眼观察，是否有真菌长出。将可疑病粒轻轻移放在另一个灭菌的培养血中 继续培养，3d后在显微镜下观察。 6.2种衣剂种子检验 将带有种衣剂的种子直接放入灭过菌的培养皿中，进行保湿培养（方法同6.1.2）。 6.3植株检验 6.3.1显微镜检查 采集的病叶，如果病部有霉层，可直接用灭菌解剖针挑取霉层，或者用透明胶带直接粘取霉层后镜 检，观察病菌形态特征。 6.3.2保湿培养 将病叶用无菌水冲洗3次后，在无菌条件下用灭菌解剖刀在病斑的病健交界处切取4cm左右放人 灭菌培养皿中，培养方法同6.1.2。长出菌后，用显微镜检查。 7隔离种植检验 种子经过实验室检疫后，必须进行田间隔离种植检疫，这是不可缺少的重要检疫手段 甜菜叶斑病一般可选择6月份和7月份调查，甜菜褐斑病（Cercosporabeticola）与甜菜叶斑病 可参见附录A和附录B根据所描述的症状，采集可疑病叶，带回实验室，检验方法同6.3。 8病原菌形态鉴定特征 端曲膝状，分生孢子卵形、长椭圆形、至圆柱状，单胞或双胞：单细胞孢子（8um～12μm）×（3μm~ 4μm），双细胞孢子（15μm~25μm）×（2μm~4μm）。参见图A2。 9结果评定 9.1种子检验 如果在种子及其病残体中检查到与第8章中所描述的形态鉴定特征相一致的病原菌，则判定为甜 菜叶斑病菌。 9.2植株检验 2