SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4322—2015 食品接触材料 高分子材料 双酚A残留量的测定 酶联免疫法 Food contact materialPolymer materialsDetermination of bisphenol A residue—Enzyme linked immunosorbent assay 行业标准信息服务平台 2015-09-02发布 2016-04-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4322—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国上海出人境检验检疫局、上海近岸科技有限公司。 本标准主要起草人：杨捷琳、缪文彬、冉晓园、朱化星、王敏、蒋伟、何宇平、潘良文、朱洪坤、吕蓉、 陈相、陶海华。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4322—2015 食品接触材料高分子材料 双酚A残留量的测定 酶联免疫法 1范围 本标准规定了高分子材料中双酚A残留量的酶联免疫测定方法。 本标准适用于高分子材料中双酚A残留量的测定。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 3方法提要 试样中残留的双酚A与试剂盒中的双酚A竞争性结合已包被在板上的双酚A特异性抗体。再与 值。吸光度值与试样中双酚A残留量呈负相关。 4 试剂和材料 除另有规定外，所有试剂均来用分析纯或生化试剂，实验用水应符合GB/T6682中一级水的规格。 4.1双酚A标准物质（BisphenolA，CAS号：80-05-7）：纯度≥99%。 4.2甲醇。 4.31×样品提取液：试剂盒中提供8×样品提取液，使用前按照1：7（8×样品提取液：水）稀释，样品 提取液主要成分为磷酸盐缓冲溶液（phosphatebufferedsolution）。 4.4双酚A抗试剂（一抗）。 4.5 双酚A酶标物（二抗）。 4.6洗涤液（1×）：试剂盒中提供10×浓缩洗涤液，使用前按照1：9（10×浓缩洗涤液：水）稀释。 4.7 底物液A液。 底物液B液。 4.9 终止液。 4.10双酚A标准工作溶液：可使用试剂盒中提供的标准工作溶液，浓度为0.0.3、1.3、10、30、100ng/mL， 也可以自行配制标准工作溶液。标准工作溶液配制方法如下：准确称取50.0mg双酚A标准物质（4.1） 于100mL容量瓶中，加人少量甲醇（4.2）溶解后，用甲醇定容至刻度，浓度为50mg/mL，然后根据需要 的标准溶液工作浓度进行稀释。 4.11双酚A酶联免疫吸附测定试剂盒（参见附录A)。 1 SN/T 4322—2015 5仪器和设备 5.1酶标仪：波长450nm。 5.2天平：感量为0.1mg。 5.3均质器。 5.4旋涡振荡器。 5.5离心机：转速不低于4000r/min 5.6注射过滤器：2mL，并带有孔径为0.45μm的水相针头式过滤膜。 5.7微量单道/多道移液器：10μL~100μL；100μL1000μL；50μL~300μL。 6测定方法 6.1试样提取 将塑料制品切割或剪成长1cm、宽2mm的小段。称取（0.5土0.01)g塑料制品至玻璃管中，加入 1×样品提取液（4.3）10mL，于70℃80℃超声提取60min；取适量的样品上清液用注射过滤器过滤。 吸取300μL滤液，冷却至室温后用于酶联免疫分析。 6.2酶联免疫测定 试剂盒中所有试剂的温度均应回升至室温（20℃～24℃）后方可使用。将测定所需的微孔条插人 微孔架上，记录标准工作溶液与样液等在微孔架上的位置。分别加入50uL的标准工作溶液（4.10）和 （20℃～25℃）孵育30min；洗板3次，每次加人250μL1×洗液，最后一次尽量吸干；每孔加人150μL 1×二抗（4.5）；室温（20℃~25℃）孵育30min；洗板3次，每次加人250μL1×洗液，最后一次尽量吸 干；加入50μL的底物A溶液（4.7）和50μL的底物B溶液（4.8），室温避光显色15min；加入100μL的 终止液（4.9)终止反应.10min内用波长450nm的酶标仪测定吸光度值。 6.3 平行试验 按以上步骤，对同一标准溶液、同样品溶液均应进行平行试验测定。 信息服务 6.4 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 6.5 监控试验 每次测定均应做一个添加双酚A标准工作溶液（4.10）的样品，添加浓度为本方法的检测低限， 7结果计算 7.1相对吸光度值的计算 分别计算标准和样品的平均吸光值。按式（1)计算标准液和样液的相对吸光度值。 A=B/BX100% (1) 2