SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4404—2015 菜豆金色花叶病毒属病毒PCR筛查方法 Screening protocol for Begomovirus by PCR 行业标准信息服务平台 2015-12-04发布 2016-07-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4404—2015 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国福建出人境检验检疫局、云南省烟草农业科学研究院、沈阳大学、 中国检验检疫科学研究院、福建农林大学。 本标准主要起草人：沈建国、于文涛、李敏、方敦煌、杨彩霞、林春滢、蔡伟、张永江、高芳、吴祖建。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4404—2015 菜豆金色花叶病毒属病毒PCR筛查方法 1范围 本标准规定了菜豆金色花叶病毒属病毒PCR筛查方法。 本标准适用于寄主植物中菜豆金色花叶病毒属病毒的检测鉴定。 2 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2122进出境植物及植物产品检疫抽样 3菜豆金色花叶病毒属基本信息 中文名称：菜豆金色花叶病毒属 英文名称：Begomovirus 分类地位：双生病毒科（Geminiviridae）。 其他信息参见附录A。 4 方法原理 Begomovirus病毒的分子生物学特性是制定本检疫鉴定方法的主要依据。根据Begomovirus病毒 的DNA保守区域设计特异性引物，建立该属病毒的分子生物学筛查方法。 5主要仪器设备 5 高速冷冻离心机、PCR仪、凝胶成像分析系统等 信息服务平台 6 检测与鉴定 6.1抽样 抽样方法按照SN/T2122中规定执行。 6.2PCR检测方法 按照附录B给出的方法，进行PCR检测。 6.3 3序列测定与分析 将PCR产物回收后，进行克隆、测序，测定的核苷酸序列与已知Begomovirus病毒序列进行比对 如果与已知的Begomovirus病毒序列同源性大于89%，则判定为Begomovirus病毒；同源性小于89% 1 SN/T4404—2015 则初步判定为Begomouirus属病毒的新种，若需进一步鉴定到具体病毒种类，应结合病毒生物学特性。 注：序列比对可利用NCBI网站上的BLAST软件进行，网址为http：//www.ncbi.nlm.nih.gov/BLAST/。 结果判定 7.1 的扩增条带，则判定为未检出。 7.2采用PCR方法检测，如果阴性对照和空白对照无特异性扩增，待测样品出现与阳性对照一致的扩 增条带，且测定的序列为Begomovirus病毒，则判定为检出。 8 结果记录 记录样品信息和检测数据，包括样品来源、种类、时间，实验的时间、地点、方法和结果以及实验人员 签字。PCR检测方法应保存电泳照片，测序结果保存测序报告图。 9样品保存 检测结果判定为阳性的样品应妥善保存在一80℃超低温冰箱中，并作好登记和标记，以备复核用。 保存期满后，需经灭活处理， 行业标准信息服务平台 2