SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4483—2016 出口活鱼泰妙菌素检测技术规范 Determination protocol of Tiamulin in fishes for export 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T4483—2016 前言 本标准按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、中华人民共和国河北出入境检验检 疫局。 本标准主要起草人：易海华、房超、祝长青、赵优、吴萍兰、张阳、杨志俊 行业标准信息服务平台 1 SN/T4483—2016 出口活鱼泰妙菌素检测技术规范 1范围 本标准规定了出口活鱼中泰妙菌素残留的高效液相色谱检测技术规范 本标准适用于出口活鱼泰妙菌素残留的检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T0376出口水产品检验抽样方法 3 试剂和材料 除另有说明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水， 3.1甲醇：色谱纯。 3.2乙腈：色谱纯。 3.30.02mol/L磷酸盐缓冲液：取0.2mol/L磷酸氢二钠94.7mL0.2mol/L磷酸二氢钠5.3mL，加 水至1L，调节pH至8.0。 3.40.1%磷酸溶液：准确移取1.0mL磷酸，加水至1L。 3.50.1%酒石酸溶液：准确称取0.10g酒石酸，用水溶解并定容至100mL。 3.6 6泰妙菌素标准物质：泰妙菌素（分子式：C2sH47NO,S；CAS号：55297-95-5），纯度≥99.8%。 3.7 泰妙菌素标准储备溶液（100mg/L）：准确称取10.0mg泰妙菌素标准物质放人100mL容量瓶 中，用甲醇溶解并定容至刻度，一18℃避光保存。 3.8泰妙菌素标准工作溶液：移取适量标准储备溶液用甲醇：0.1%磷酸溶液（1：9，体积比）配制 0.20μg/mL~2.0μg/mL系列标准工作溶液，供液相色谱法测定用，用前配制。 3.9OasisHLB固相萃取柱会或相当者：60mg，3mL（或相当者），使用前依次用3mL甲醇、3mL 息服务平台 0.1%酒石酸活化。 3.10滤膜：0.45um有机相滤膜。 4仪器 4.1 高效液相色谱仪：配二极管阵列检测器 4.2 天平：感量0.01g，0.0001g。 4.3振荡器。 4.4离心机。 4.5 均质器。 4.6 恒温氮吹设备。 1 SN/T4483—2016 4.7 涡旋混合器。 5样品制备 5.1制样 试样按照SN/T0376进行抽样，开膛，去除内脏，取可食部分，全部搅碎后混匀，按四分法分样，均 分成2份，装人洁净的容器密封，并标明标记 5.2 试样保存 将试样于2℃～8℃下避光保存，检测样品务必保持新鲜，不能使用腐烂样品检测 6测定 6.1提取 称取10g均匀试样（精确到0.01g）于100mL离心管中，加入10mL磷酸盐缓冲液（pH8.0），均 质，加入30mL乙酸乙酯，涡旋混勾1min，以5000r/min离心10min，取乙酸乙酯层于100ml鸡心 瓶中。残渣用20mL乙酸乙酯重复提取一次。合并两次提取液，40℃旋转蒸发至近干，加入2mL 0.1%酒石酸溶液转移至离心管，加人5mL石油醚去脂，涡旋30s，以5000r/min离心5min，弃上层。 用5mL石油醚重复去脂一次。 6.2净化 将上述试液过OasisHLB柱，依次用3mL0.1%酒石酸淋洗，用5mL甲醇洗脱。洗脱液于40℃ 供高效液相色谱测定。 6.3测定 6.3.1液相色谱条件 液相色谱条件如下： 色谱柱：Cis柱，250mmX3.9mm（内径），5μm或相当者； 流动相：甲醇：0.1%磷酸溶液（体积比10：90） 信息服务平 b) c) 检测波长：210nm； d) 流速：1.0mL/min; 柱温：40℃； f) 进样量：5uL。 6.3.2色谱测定 按照液相色谱条件对样液及标准工作溶液进样，以标准工作溶液浓度为横坐标，以峰面积为纵坐 标，绘制标准工作曲线，用标准工作曲线对样品定量，测定样液和标准工作溶液中被测化合物的响应值 均应在仪器测定的线性范围内。 如果待测样品溶液中被测物的保留时间与标准工作溶液中被测物的保留时间偏差在士2.5%之内， 可判定为样品中存在对应的待测物 2