SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4533.1—2016 商品化试剂盒检测方法 β-内酰胺酶 方法一 Commercial kit methodBeta-lactamaseTest method I 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4533.1—2016 前言 本部分为SN/T4533《商品化试剂盒检测方法β-内酰胺酶》的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分主要起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、深圳市易瑞生物技术有限公司、 中华人民共和国福建出人境检验检疫局、合肥工业大学、深圳市检验检疫科学研究院、中华人民共和国 上海出人境检验检疫局、内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司。 本部分主要起草人：薛峰、曾德新、胡月珍、蒋原、朱海、杨捷琳、郑晶、李梅、蔡宝亮、陈伟、颜治。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4533.1—2016 商品化试剂盒检测方法 β-内酰胺酶方法一 1范围 SN/T4533的本部分规定了纯牛奶中β-内酰胺酶残留量的胶体金免疫层析检测方法。 本部分适用于采用胶体金免疫层析试纸条对纯牛奶中β-内酰胺酶残留进行筛选检测。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 3原理 本试验为反间接竞争抑制法测定样品中β-内酰胺酶的含量。利用β-内酰胺酶可分解青霉素的原 理，快速测定与β-内酰胺酶反应后残留的青霉素的含量，从而间接检测纯牛奶中残留的β-内酰胺酶。 4试剂与材料 4.1 β-内酰胺酶检测试剂盒 本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价 结果参见附录A。 商品化试纸条、反应杯及反应试剂在2℃～8℃、干燥、避光条件下保存，产品有效期不得少于12个 月。试剂盒组成如下： a）β-内酰胺酶检测试纸条； b) 白色微孔（主要成分为青霉素G）； c) 4.2试剂 β-内酰胺酶对照品。 5 仪器设备 5.1温育器：40℃±2℃。 5.2便携式读数仪： 测量波长：525nm，带宽士8nm，波长准确度士3nm 计算方式：峰面积分析，并可计算检测线峰面积/控制线峰面积比值。 1 SN/T 4533.1—2016 5.3 3移液器：200μL。 6样品制备 检测前样品需充分混匀。 7分析步骤 7.1将温育器温度设定为40℃；吸取200uL样品于白色微孔中，5～10次抽吸，迅速混合均匀并置于 温育器温育9min。 7.2将白色微孔中的全部样品转移至红色微孔中，上下抽吸8～10次左右。 7.3将红色微孔中全部溶液转移回原白色微孔中，上下再抽吸5～6次混匀。 7.4置于温育器中温育3min。 7.5温育结束后，将试纸条插人到微孔中温育3min。 7.6温育结束，停止计时，从微孔中取出测试条，去掉测试条下端的吸水海绵并进行结果判定。 7.7检验完毕，余下的测试条密封好放到试剂盒中，2℃～8℃保存。 8结果判定 通过对比控制带和检测带的颜色深浅来进行结果判定。由于长时间放置会引起检测带颜色的变 化，需在5min内进行结果判定。 a）目视结果判定依据（如图1所示）： 1）无效：质控线（C线）不出现色带； 内酰胺酶，或者β-内酰胺酶残留的水平低于本产品的检出限； 3）阳性（十）：“检测”带（T线）的显色与“控制”带（C线）一样深或者更深，则说明检测的样品 中残留的β-内酰胺酶高于本产品的检出限 一吸水纸 控制线 +NC膜 β-内酰胺酶检测线 一海绵端 试纸条示意图 无效阴性 空白试纸 阳性 图1目视判定示意图 b 通过便携式读数仪对试纸条读值，并依据下列方式进行判定： 1）阴性：读数数值<0.6，则判为阴性； 2