SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4538.1—2016 商品化试剂盒检测方法 三聚氰胺 方法一 Commercial kit method- Melamine-Test method I 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4538.1—2016 前言 SN/T4538《商品化试剂盒检测方法 三聚氰胺》分为以下4个部分： 商品化试剂盒检测方法 SN/T 4538.1 三聚氰胺 方法一； 商品化试剂盒检测方法 -SN/T4538.2 三聚氰胺 方法二； 商品化试剂盒检测方法 -SN/T4538.3 三聚氰胺 方法三； —SN/T4538.4商品化试剂盒检测方法 三聚氰胺 方法四。 本部分为SN/T4538系列标准的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口 本部分起草单位：中国检验检疫科学研究院、北京维德维康生物技术有限公司。 本部分主要起草人：邹明强、王燕飞、李莉、马吉湘、薛强。 行业标准信息服务平台 1 SN/T4538.1—2016 商品化试剂盒检测方法 三聚氰胺 方法一 1范围 本部分规定了乳制品中三聚氰胺酶联免疫检测方法。 本部分适用于采用酶联免疫竞争法定性定量检测液态奶与奶粉中的三聚氰胺。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 3原理 在酶标板微孔中预包被偶联抗原，样品中残留的三聚氰胺和微孔中预包被的偶联抗原竞争三聚氰 胺抗体，加入酶标二抗，用TMB底物显色，样本吸光值与其残留物三聚氰胺的含量成负相关，与标准曲 线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中三聚氰胺的含量。 4试剂与材料 4.1三聚氰胺酶联免疫检测试剂盒 在2℃～8℃条件下运输与保存，产品有效期12个月。 维信息服务平台 本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价 结果参见附录A。试剂盒组成如下： a) 三聚氰胺包被酶标板； b) 三聚氰胺标准品工作液； c) 三聚氰胺抗体工作液； d) 酶标二抗工作液； e) 浓缩样品稀释液； 浓缩洗涤液； 底物溶液； h) 终止液。 5 5仪器与设备 5.1 微孔板酶标仪450nm/630nm 1 SN/T4538.1—2016 5.2 2振荡器 5.3 3涡漩仪 5.4离心机 6样品制备 6.1 液态奶 取10mL液态奶样品于离心管中，平衡至室温并充分混匀，取50μL进行检测。 6.2奶粉 6.2.1称取1g奶粉于50mL离心管中，加人6mL去离子水，剧烈涡漩1min，至奶粉完全溶解 6.2.2取500μL样品稀释液于新的离心管中，加人500μL溶液后样品，充分涡旋30s，取50μL进行 检测。 7分析步骤 7.1将所需试剂置于室温（20℃～25℃）平衡30min以上，试剂使用前摇匀。 7.2取出需要数量的微孔板，将不用的微孔板放入自封袋，保存于2℃～8℃。 7.3洗涤工作液在使用前也需回温。 7.4编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔 所在的位置。 7.5加标准品/样本：加标准品/样本50μL到对应的微孔中； 7.6加人抗体工作液50uL/孔，轻轻振荡混匀，用盖板膜盖板后置25℃避光环境中反映30min。 7.7洗板：小心揭开盖板膜，将孔内液体甩干，用洗涤工作液250μL/孔，充分洗涤3次，每次间隔10s， 用吸水纸拍干，拍干后未被清除的气泡可用未使用过的枪头戳破。 7.8加人酶标IⅡ抗工作液100μL，避光反应30min。 7.9重复7.7。 25℃避光环境反应20min。 7.11测定：加入终止液50uL/孔，轻轻振荡混匀，设定酶标仪于450nm处，最好用双波长450/630nm 检测，在5min内读完数据，测定每孔OD值。 8结果判定 8.1百分吸光率的计算，标准品或样本的百分吸光率等于标准品或样本的百分吸光度值的平均值（双 孔）除以第一个标准（0标准）的吸光度值，再乘以100%，见式（1）： B 百分吸光度值 ..(1) 式中： B一标准溶液或样本溶液的平均吸光度值； B。- 一0×10-标准溶液的平均吸光度值 8.2标准曲线的绘制与计算 以标准品百分吸光率为纵坐标，以氯霉素标准品浓度（×10-6）的对数为横坐标，绘制标准曲线图。 2