SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4540.1—2016 商品化试剂盒检测方法 孔雀石绿 方法一 Commercial kit method- Malachite greenTest method I 行业标准信息服务平台 2016-06-28发布 2017-02-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4540.1—2016 前言 本部分为SN/T4540《商品化试剂盒检测方法孔雀石绿》的第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分主要起草单位：中华人民共和国江苏出人境检验检疫局、深圳市易瑞生物技术有限公司、 中国检验检疫科学技术研究院、深圳市检验检疫科学研究院、合肥工业大学。 本部分主要起草人：薛峰、封振、胡月珍、蒋原、蔡宝亮、付辉、陈伟、蒋鲁岩、余兵、薛强、易丙清。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4540.1—2016 商品化试剂盒检测方法 孔雀石绿 方法一 1范围 SN/T4540的本部分规定了虾组织中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫残留的胶体 金免疫层析检测方法。 本部分适用于采用胶体金免疫层析试纸条对虾组织中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶 紫残留进行筛选检测。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 3原理 应用胶体金竞争抑制免疫层析法的原理，样品中残留的孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结 晶紫与检测线上的孔雀石绿抗原共同竞争胶体金标记的特异性抗体，通过检测线与控制线颜色深浅比 较，对样品中孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫的含量定性判定。 4试剂与材料 4.1孔雀石绿检测试剂盒 本试剂盒参考SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会进行了评价，评价 结果参见附录A。 信息服务平台 商品化试纸条、反应杯及反应试剂在2℃～8℃干燥、避光条件下保存，产品有效期不得少于12个 月。试剂盒组成如下： a）孔雀石绿检测试纸条； 白色微孔（主要成分为牛血清白蛋白）； c) 红色微孔（主要成分为胶体金标记的孔雀石绿抗体） d) 试剂A（主要成分为乙酸钠和对甲基苯磺酸）； e) 试剂B（主要成分为乙腈、二氯甲烷和冰乙酸）； f) 试剂C(主要成分为中性氧化铝)； g) 试剂D（主要成分为磷酸缓冲液）； 氧化试剂（主要成分为DDQ）。 4.2试剂 a） 孔雀石绿、隐性孔雀石绿、结晶紫和隐性结晶紫对照品。 1 SN/T4540.1—2016 b）正已烷。 5仪器设备与耗材 5.1 移液器：200μL。 5.2 移液器：10mL。 5.3氮吹仪或空气吹干仪。 5.4匀质器。 5.5涡旋震荡仪。 5.6离心机。 5.7滴管：5mL。 5.8离心管：50mL 5.9离心管：15mL。 6样品制备 6.1将虾去皮取肉，用匀质器匀质样品至糊状 6.2称取5g士0.1g均质好的样品于干净的50mL离心管中，依次加人2mL提取试剂A和10ml 提取试剂B，拧紧盖子充分震荡2min~4min。 6.3将试剂C中粉未全部倒入6.2中，拧紧盖子并上下充分摇20s~30s，室温4000r/min离心 5min；从中吸取5mL上清于干净的15mL离心管中，加入50μL氧化剂混匀，拧紧盖子上下颠倒混匀 并室温放置1min~2min； 6.4加入5mL正已烷，拧紧盖子上下充分颠倒混匀5次~6次，室温放置3min；采用5mL滴管吸取 3.5mL下层于5mL离心管中，65℃氮吹仪或空气吹干仪吹干。 注：加入正已烷颠倒混匀后，液体一般情况下会分为上下两层。但是偶尔6.3中样品离心后放置过久后脂肪会漂 浮于上层，此情况下取上清样品加人正已烷后可能会形成三层，会出现底部的脂肪层；此时滴管插人下层吸取 溶液时请尽量不要吸取底部脂肪沉淀或脂肪层。 6.5加人200μL样品复溶液，震荡15s～20s即为处理后的样品。 注：从试剂盒中取出白色微孔试剂，按照每孔加入200pμL试剂D，混匀即为样品复溶液。 7分析步骤 7.1吸取全部处理后的样品于微孔中，5次～10次抽吸迅速混合均匀并置于室温温育3min。 7.2温育结束后，将试纸条插人到微孔中室温温育5min。 7.3温育结束，停止计时，从微孔中取出测试条，去掉测试条下端的吸水海绵并进行结果判定 7.4检验完毕，余下的测试条密封好放到试剂盒中，2℃～8℃保存。V 8结果判定 通过对比控制带和检测带的颜色深浅来进行结果判定。由于长时间放置会引起检测带颜色的变 化，需在5min内进行结果判定。 目视结果判定依据（如图1所示）： a）无效：控制线（C线）不显色。