SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 4543.1—2016 代替SN/T2060—2008 商品化试剂盒检测方法 泰乐菌素 方法一 Commercial kit method- TylosinTest method I 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4543.1—2016 前 言 本部分为SN/T4543中第1部分。 本部分按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本部分代替了SN/T2060—2008《出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法 酶联免疫法》。 本部分与SN/T2060—2008主要技术变化如下： 一标准名称由《出口蜂王浆中泰乐菌素残留量测定方法 酶联免疫法》改为《商品化试剂盒检测 方法泰乐菌素方法一》。 一附录中增加了试剂盒的评估结果。 请注意本文件的某些内容可能涉及专利。本文件的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国浙江出人境检验检疫局、浙江迪恩科技有限公司产品。 本部分主要起草人：帅江冰、张晓峰、昊娜姗、邵宏宏、李可、王晏子。 本部分所代替标准的历次版本发布情况为： -SN/T2060—2008。 行业标准信息服务平台 1 SN/T 4543.1—2016 商品化试剂盒检测方法 泰乐菌素 方法一 1范围 SN/T4542的本部分规定了蜂王浆和王浆粉中泰乐菌素残留量的酶联免疫测定方法。 本部分适用于蜂王浆和王浆粉中泰乐菌素残留量的筛选测定 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 SN/T2775商品化食品检测试剂盒评价方法 3方法提要 本部分以酸性的庚烷磺酸钠缓冲液来提取蜂王浆中残留的泰乐菌素，沉淀王浆中蛋白后并调节 pH至7.0处理后，样品中残留的泰乐菌素与酶标记泰乐菌素共同竞争结合至包被在微孔板上的绵羊抗 免抗体，通过洗涤除去未结合的泰乐菌素和酶标记泰乐菌素，然后加人底物显色，用酶标仪测定吸光度， 根据吸光度值得出试样中泰乐菌素的含量。 4试剂和材料 除注明外，所有试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。 4.1泰乐菌素检测试剂盒。 本试剂盒按照SN/T2775由国家认监委商品化食品检测试剂盒评价专家委员会评价。具体评价 参见附录A。试剂盒组成如下： a）预包被抗体的96孔板：12条×8孔。 b) 泰乐菌素标准溶液：0ng/mL、0.2ng/mL.0.625ng/mL、2.5ng/mL10.5ng/mL.50ng/mL。 泰乐菌素酶标记物溶解液 c) d) 泰乐菌素酶标记物冻干粉：根据泰乐菌素试剂盒中说明，可用泰乐菌素酶标记物溶解液配制成 泰乐菌素酶标记物溶液。 e) 显色剂。 f) 样品稀释液：根据泰乐菌素试剂盒中说明，可用蒸馏水10倍稀释后使用。 浓缩清洗液（10倍浓缩）：可用水稀释后使用。 h）反应终止液。 试剂盒应在2℃～8℃避光条件下保存。 1 SN/T 4543.1—2016 4.2 磷酸钠（Na:PO：12H,O） 4.3庚烷磺酸钠[CH（CH2)SO.Na]。 4.4磷酸。 4.5磷酸氢钠(NazHPO·12H,O)。 4.6甲醇。 4.7庚烷磺酸钠缓冲液：称取11.4g磷酸钠（4.2）和10.1g庚烷磺酸钠（4.3），用蒸馏水定容到1L用 磷酸调节pH至2.0。 4.8磷酸盐缓冲液：称取磷酸氢钠（4.5)34g，用蒸馏水定容到1L，调节pH至8.0。 4.9泰乐菌素标准物质：纯度≥98%。 4.10泰乐菌素标准品溶液的配制：用甲醇（4.6）作为溶剂配制成400ug/mL的储存液，于一20℃条件 下保存。 5仪器和设备 5.1酶标仪。 5.2八道移液器：10μl~100μL。 5.3单道移液器:10μL~100μL,100μL~1000μL和2mL~10mL。 5.4混合振荡器。 5.5高速低温离心机：6000r/min。 5.6具塞试管：50mL 5.7 电子天平：0.01g~100g。 5.8 酸度计：精确到0.1。 6 试样的制备与保存 6.1 1试样的制备 原始样品总量不得少于200g，蜂王浆充分搅拌均匀后，将样品分成两等份；冻干粉采用四分法，将 准信息服务平 样品分成两等份。分好的样品装入洁净容器，加封并做标识。 6.2 2试样的保存 将样品于一20℃~-18℃条件下保存。 7分析步骤 7.1试样的提取 称取2.0g蜂王浆样品，置于50mL具塞试管中，加人6mL（精确到0.1mL）庚烷磺酸钠缓冲液 （4.7），充分振荡，15℃下6000r/min离心10min直至清亮，取0.5mL上清液于一干净试管，加人 0.5mL磷酸盐缓冲液（4.8），混合均匀；用磷酸（4.4)调节pH至6.8～7.2，此溶液即可供ELISA检测用。 最后稀释倍数为8。王浆冻干粉则用水以1：2比例稀释，充分浸泡（2h以上）后，称取2.0g按照上述 王浆前处理方法进行提取，最后稀释倍数为24。 2