SN 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T4624.5—2016 入境环保用微生物菌剂检测方法 第5部分：β型溶血性链球菌 Methods for examination of import microbial blends in the environmental protection-Part 5:β Streptococcus hemolyticus 行业标准信息服务平台 2016-08-23发布 2017-03-01实施 中华人民共和国 发布 国家质量监督检验检疫总局 SN/T 4624.5—2016 前言 SN/T4624《人境环保用微生物菌剂检测方法》共分为17部分： 第1部分：地衣芽孢杆菌； 第2部分：短小芽孢杆菌； 第3部分：巨大芽孢杆菌； 一第4部分：嗜酸氧化亚铁硫杆菌； 第5部分：β型溶血性链球菌； 一第6部分：金黄色葡萄球菌； 第7部分：沙门氏菌； 第8部分：志贺氏菌； 第9部分：致泻大肠埃希氏菌； 第10部分：淡紫拟青霉； 第11部分：雅致小克银汉霉； 第12部分：哈茨木霉； 第13部分：黄孢原毛平革菌； 第14部分：焦曲霉； 第15部分：解淀粉芽孢杆菌； 第16部分：类产碱假单胞菌； 第17部分：恶臭假单胞菌。 本部分为SN/T4624的第5部分。 本部分按照GB/T1.1—2009给出的规则起草。 本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。 本部分起草单位：中华人民共和国辽宁出人境检验检疫局。 本部分主要起草人：李成镛、崔妍、赵颖、蒋施、张明、雷佳、王芳。 标准信息服务平台 1 SN/T4624.5—2016 入境环保用微生物菌剂检测方法 第5部分：β型溶血性链球菌 1范围 SN/T4624的本部分规定了入境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的形态学鉴定、 生化鉴定。 本部分适用于人境环保用微生物菌剂卫生学检验β型溶血性链球菌的检测和鉴定。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文 件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 主要试剂和培养基 3.1 实验用水：应符合GB/T6682中一级水的规格。 3.2 生理盐水：见附录A中A.1。 3.3 改良胰蛋白陈大豆肉汤培养基（mTSB）：见A.2。 3.4 哥伦比亚CNA血琼脂：见A.3。 3.5 哥伦比亚血琼脂：见A.4。 3.6 草酸钾血浆：见A.5。 3.7 0.25%氯化钙（CaCl）溶液：见A.6。 3.8 3%过氧化氢（H，O2）溶液：见A.7。 标准信息服务平台 3.9 生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡。 4 主要仪器和设备 电子天平：感量0.01g。 4.2 恒温培养箱：36℃士1℃。 4.3 厌氧培养装置。 4.4 高压灭菌锅。 4.5 无菌培养皿：直径90mm。 4.6 水浴装置：36℃±1℃。 4.7 微生物生化鉴定系统。 5 样品制备 以无菌操作取1g（mL）样品加人到100mL生理盐水中混匀，从中移取25mL加入到225mL灭 1 SN/T4624.52016 6 形态学及生化鉴定 6.1增菌 从上述样品匀液中取25mL加人到盛有225mLmTSB的均质袋中混匀，于36℃士1℃培养 18 h~24 h。 6.2分离培养 将增菌液划线接种于哥伦比亚CNA血琼脂平板，36℃士1℃厌氧培养18h～24h，观察菌落 形态。 溶血链球菌在哥伦比亚CNA血琼脂平板上的典型菌落形态为直径约2mm3mm，灰白色、半透 明、光滑、表面突起、圆形、边缘整齐，并产生β型溶血。 6.3 3革兰氏染色 将6.2中平板上的菌落做涂片进行革兰氏染色，镜检 β型溶血性链球菌为革兰氏染色阳性，呈球形或卵圆形，常排列成短链状。 6.4生化鉴定法 6.4.1触酶试验 挑取可疑菌落于洁净的载玻片上，滴加适量3%过氧化氢溶液，立即产生气泡者为阳性。β型溶血 性链球菌触酶为阴性。 6.4.2链激酶试验（选做项目） 吸取草酸钾血浆0.2mL，加0.8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入经36℃士1℃培养18h~24h的 可疑菌的TSB培养液0.5mL及0.25%氯化钙溶液0.25mL，振荡摇匀，置于36℃土1℃水浴中 10min，血浆混合物自行凝固（凝固程度至试管倒置，内容物不流动）。继续36℃土1℃培养24h，凝固 6.4.3其他试验 使用生化鉴定试剂盒或生化鉴定卡对可疑菌落进行鉴定。 7结果报告 综合以上溶血性链球菌的形态学、生理生化试验的结果，报告1g(mL）样品中检出（或未检出）溶血 性链球菌。 2