ICS 01.040.65 SN B 41 中华人民共和国出入境检验检疫行业标准 SN/T 5120—2019 进出口食用动物、饲料中亚硝酸盐测定 比色法和离子色谱法 Determination of nitrite in edible animal and feeds for import and export- Colorimetric analysis and ion chromatography 2019-09-03发布 2020-03-01实施 中华人民共和国海关总署 发布 SN/T5120—2019 前言 本标准按照GB/T1.1一2009给出的规则起草。 本标准由中华人民共和国海关总署提出并归口。 本标准起草单位：中华人民共和国深圳海关、深圳市检验检疫科学研究院。 本标准主要起草人：杨俊兴、王丙涛、孙洁、刘建利、张彩虹、涂小珂、林彦星、吕建强、花群义、 秦智锋。 业标准信息服务平台 SN/T5120—2019 进出口食用动物、饲料中亚硝酸盐测定 比色法和离子色谱法 1范围 本标准规定了进出口食用动物、饲料中亚硝酸盐的测定方法。 本标准适用于进出口食用动物、饲料中亚硝酸盐的测定。 本标准的方法检出限：比色法为0.5mg/kg（或mg/L）；离子色谱法为0.1mg/kg（或mg/L）。 2规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本 文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T14699.1饲料采样 GB/T20195动物饲料 3比色法 3.1原理 在弱碱性条件下去除样品中的蛋白质、脂肪等，亚硝酸盐和对氨基苯磺酸在弱酸性条件下反应，生 成重氮化合物，再与盐酸萘乙一胺偶合生成紫红色化合物，颜色深度与亚硝酸盐含量成正比，比色法 定量。 3.2试剂 除另有说明外，所用试剂均为优级纯，实验用水应符合GB/T6682中规定的一级水。 3.2.1无水对氨基苯磺酸（CH,NO.S） 3.2.2盐酸乙二胺（C12HiN²·2HCI) 3.2.3氯化铵缓冲液：取500mL水，加25mL盐酸和60mL氨水至1000ml容量瓶中，混匀，定容至 1 000mL,调节 pH至 9.6-9.7。 3.2.4氢氧化钠溶液（20g/L）：称取20.0g氢氧化钠，用水溶解，定容至1000mL。 3.2.5乙酸锌溶液（220g/L）：称取110.0g乙酸锌，加15mL冰乙酸溶解，用水稀释至500mL。 3.2.6对氨基苯磺酸溶液（4g/L）：称取4.0g无水对氨基苯磺酸，加300mL热水溶解，加200mL冰 乙酸，稀释至1000mL，于棕色瓶避光保存。 3.2.7盐酸萘乙二胺溶液（1g/L）：称取1.0g盐酸萘乙二胺，加水溶解，稀释至1000mL，棕色瓶避光 保存。 3.2.8亚硝酸盐标准储备液（1000mg/L）：购买国家标准溶液；或者准确称取0.150g于110℃~ 120℃干燥恒重的亚硝酸钠，加水溶解，转移至100mL容量瓶中，定容至刻度，摇匀，避光保存。 3.2.9亚硝酸盐标准工作液（10.0mg/L）：使用前，准确吸取标准储备溶液（3.2.8）1.0mL于100mL 1 SN/T5120—2019 容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀备用。 3.3仪器 3.3.1 分光光度计 3.3.2 分析天平：感量0.0001g 3.3.3 恒温水浴锅 3.3.4 涡旋混合器 3.4分析步骤 3.4.1 试样制备 3.4.1.1 饲料：按照GB/T14699.1采集代表性样品，按照GB/T20195制备饲料试样供实验室检测 使用。 3.4.1.2血液：采集动物血液10mL，室温静置约30min，使血液自然凝固。必要时，5000r/min离心 10min，收集上清液转移至另一离心管中备用。 3.4.1.3尿液：取动物新鲜尿液50mL，混匀，5000r/min离心10min后取上清液备用。 3.4.2提取净化 3.4.2.1粗饲料：称取3~5g试样（精确至0.01g），置于100mL具塞比色管中，加60mL水，涡旋混 匀，置于70℃水浴中加热15min，取出冷却，转移至100mL容量瓶中，定容，静置15min，过滤，弃去初 滤液25mL，收集备用。 3.4.2.2配合饲料、鱼粉、酵母蛋白等：称取3~5g勾质试样（精确至0.01g），置于100mL具塞比色管 中，加60mL水混勾，加人2.0mL氢氧化钠溶液（3.2.4），置于70℃水浴中加热15min，取出冷却，转移 至100mL容量瓶中，加8.0mL乙酸锌溶液（3.2.5）混匀以沉淀蛋白，定容，静置15min，除去上层脂肪， 过滤，弃去初滤液25mL，收集备用。 3.4.2.3血液、尿样：准确吸取2.0mL匀质试样，置于100mL具塞比色管中，加60mL水和2.0mL NaOH溶液（3.2.4)混匀，置于70℃水浴中加热15min，取出冷却，转移至100mL容量瓶中，加入 8.0mL乙酸锌溶液（3.2.5）混匀以沉淀蛋白，定容，静置15min，过滤，弃去初滤液25mL，收集备用。 3.4.3亚硝酸盐的测定 吸取0.0，0.250.5，1.0，2.0，3.0，4.0.5.0mL亚硝酸盐标准工作液（3.2.9）到25mL容量瓶中（相当 于配制0、2.5、5.0、10.0、20.0、30.0、40.0、50.0ug亚硝酸盐标准系列），分别加人4.0mL氯化铵缓冲液 （3.2.3）和1.0mL盐酸，立即加人2.0mL对氨基苯磺酸溶液（3.2.6）和2.0mlL盐酸乙二胺溶液 （3.2.7）进行显色，加水至刻度，混匀，静置10min，用2cm比色杯，以零管调节零点，于538nm波长处 测定吸光度，以吸光度为纵坐标，标准溶液中所含亚硝酸盐质量为横坐标，绘制标准曲线。同样方法，取 10mL提取净化后的试液（3.4.2）于25mL容量瓶中，分别加入4.0mL氯化铵缓冲液（3.2.8）和1.0ml 盐酸，立即加入2.0mL对氨基苯磺酸溶液（3.2.6）和2.0mL盐酸萘乙二胺溶液（3.2.7）进行显色，用水 定容至刻度，混匀，静置10min，上机测定。 3.5结果计算 试样中亚硝酸盐的含量按式（1）进行计算。 X= m2X Vi (1) mi X V2 2